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背景：病毒蛋白R(virus protein R,vpr)是人免疫缺陷病毒(human immunodefifiency virus,HIV)基因组的4个辅助基因之一。vpr基因产生的Vpr蛋白在HIV感染宿主细胞的过程和艾滋病(acquired immunodefifiency syndrome,AIDS)的发病机制中起重要作用。它参与病毒整合前复合体的核转运,激活病毒的转录过程,诱导细胞周期的G2/M期停滞,促进感染细胞凋亡。NKG2D是NK细胞表面主要的活化型受体之一,与其配体ULBPs结合后传导活化信号,诱导NK细胞毒效应以杀伤靶细胞。本文将研究HIV-1Vpr对ULBPs表达的影响,证实vpr基因是激活NKG2D的配体并介导NK细胞毒效应的病毒因素之一。目的：体外细胞实验观察转染了HIV vpr基因的jurkat细胞表面的NKG2D配体ULBP1和ULBP2的表达情况,印证本研究室前期观察的HIV感染者CD4+T淋巴细胞表面的NKG2D配体ULBP1和ULBP2较正常人上升的实验结果；细胞毒实验中以抗体封闭NK细胞表面的NKG2D受体后,观察其对vpr表达阳性的jurkat细胞杀伤力的变化,探索HIV-1Vpr可能通过调节NKG2D配体的表达,激活NK细胞毒效应杀伤CD4+T淋巴细胞的分子机制。本研究将有助于进一步阐明HIV-1的致病机制,为艾滋病的治疗寻找新的有效分子靶点打下基础。方法：目的基因HIV-1vpr来自BSXCYPYVPRXCTHY质粒。送质粒DNA测序以鉴定vpr片段的基因系列。将vpr用脂质体转染法转染至急性T细胞白血病细胞株jurkat细胞,用含1640和胎牛血清的培养基培养三天后,RT-PCR检测目的基因mRNA水平的表达。流式细胞术检测转染了vpr基因、转染了空载体和未转染的jurkat细胞表面ULBP1/ULBP2配体双阳性表达水平。密度梯度离心法从外周静脉血中分离单个核细胞(PBMC),磁珠分选出NK细胞(CD56阳性细胞),台盼兰染色计数活细胞后,以来自健康正常人和HIV-1感染者的NK细胞和NKG2D抗体封闭的NK细胞为效应细胞,以转染了vpr基因和未转染vpr和PCD基因的jurkat细胞为靶细胞,效靶比为：9：1,通过细胞毒实验比较效应细胞对靶细胞的杀伤作用。结果：DNA测序结果表明BSXCYPYVPRXCTHY质粒携带的DNA片段与HIV vpr已知基因序列完全一致；用脂质体转染法将vpr基因片段和PCD空载体分别转染至jurkat细胞,RT-PCR检测到目的基因vpr的表达。流式细胞术检测到转染了vpr基因的jurkat细胞表面ULBP1/ULBP2配体双阳性表达水平较未转染vpr基因的细胞升高。细胞毒实验表明NKG2D封闭后的NK细胞对jurkat细胞的杀伤力下降；来自HIV感染者的NK细胞对jurkat细胞杀伤力低于来自正常人的NK细胞。结论：1.转染了HIV vpr基因片段的jurkat细胞表面ULBP1/ULBP2受体双阳性表达水平较PCD转染组和空白组的表达水平升高,提示HIV-1Vpr能上调jurkat细胞表面NKG2D配体的表达,通过体外细胞实验证实了本研究室之前的临床研究结果：HIV感染者CD4+T淋巴细胞表面的NKG2D配体ULBP1和ULBP2表达较正常人升高；并排除其他基因产物的影响,进一步表明vpr在其中的关键作用。2.NK细胞表面的NKG2D受体被特异性抗体封闭后,较未封闭NKG2D受体的NK细胞对jurkat细胞杀伤力下降,揭示vpr感染后,NK细胞通过活化性受体NKG2D与配体ULBP-1和ULBP-2结合,传导信号以施行NK细胞毒性。3、来自HIV感染者的NK细胞对vpr表达阳性的jurkat细胞杀伤力低于来自正常人的NK细胞,提示HIV感染后其NK细胞的细胞毒作用可能受损。