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摘要：血管新生是一个复杂的生物学过程,但其具体机制目前尚未完全明了。核仁素是一种具有多种生物学功能,在真核生物中高度保守的核仁磷酸蛋白,也是一种重要的RNA结合蛋白,具有在核仁、胞核、胞浆,甚至细胞膜表面穿梭的特性。大量研究表明,细胞膜表面核仁素参与血管新生的调节。然而,核仁素的RNA结合特性在血管新生中有何作用,目前仍不清楚。本研究在明确核仁素对血管新生起调节作用后,拟初步探讨其RNA结合特性在血管新生中的作用及其可能的机制。本实验首先通过建立小鼠心肌缺血模型,利用免疫组化和免疫荧光技术观察血管新生和核仁素的表达,并采用PCR和Western Blot技术检测血管新生相关基因和核仁素的表达。其次,在细胞水平,建立VEGF诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)发生细胞迁移和管型形成的模型,采用增加和降低核仁素表达的研究手段,探讨核仁素在VEGF诱导内皮细胞迁移和管型形成中的作用；同时利用PCR和Western Blot技术观察血管新生相关基因的表达情况。最后利用蛋白质-RNA免疫共沉淀技术探讨血管新生中核仁素可能调控的相关靶基因,以阐明核仁素在血管新生中发挥作用的可能机制。主要实验结果如下：1.整体动物实验。(1)免疫组化和免疫荧光分析发现：心肌缺血后15天,缺血组心肌组织中核仁素和血管内皮钙粘蛋白表达升高,与假手术组比,具有统计学意义。(2)PCR和Western Blot技术检测显示：缺血组心肌组织中核仁素和血管新生相关基因表达升高,与假手术组比,差异具有统计学意义。(3)HE染色显示核仁素转基因小鼠血管密度明显增高,免疫组化、PCR和Western Blot技术检测显示血管新生相关基因表达升高,与野生型小鼠相比,差异具有统计学意义。2.细胞实验。(1)PCR和Western Blot技术检测显示VEGF可诱导HUVEC核仁素表达升高,并在一定程度上呈时间和浓度依赖性。(2)核仁素过表达能促进VEGF诱导的HUVEC发生细胞迁移和管型形成；反之,siRNA介导的核仁素低表达则能抑制VEGF诱导的HUVEC发生细胞迁移和管型形成。(3)生物信息学分析显示多个血管新生相关基因如VE-cadherin, Tie-2, MMP9, Endoglin, COX43等的mRNA含有一个或多个核仁素的结合元件。(4)PCR和Western Blot技术检测显示siRNA介导的核仁素低表达能抑制血管新生相关基因的表达。(5)利用蛋白质-RNA免疫沉淀技术,发现核仁素与血管新生相关基因MMP9, Endoglin, integrin a V有相互作用。本实验可得出如下结论：1.C23能促进血管新生。2.C23的RNA结合特性可能参与了VEGF介导的血管新生。