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鸭坦布苏病毒（Duck tembusu virus,DTMUV）是黄病毒科（Flaviviridae）的成员,可感染多种水禽,引起产蛋下降,该病传播迅速,给水禽业造成了严重经济损失。microRNAs（miRNAs）是一类长度约为22nt的非编码小RNA,主要在转录后水平调节基因表达,参与免疫反应和病毒感染等多种生物学进程。然而miRNAs在DTMUV感染鸭胚成纤维细胞（Duck embryo fibroblast,DEF）中的生物学功能至今尚未见报道。因此,本研究通过高通量测序技术获得DTMUV感染宿主细胞DEF的miRNAs表达谱,并选择表达差异显著的miR-221-3p作为研究对象,探讨miR-221-3p及其靶基因SOCS5对DTMUV复制的影响。1 DTMUV感染DEF差异表达miRNAs的筛选DTMUV CQW株感染DEF,36h后收集细胞提取总RNA,通过Illumina高通量测序技术获得287个已知miRNAs和63个新miRNAs;分析发现感染组中有26个已知miRNAs和22个新miRNAs的表达量发生了变化,其中有37个miRNAs表达量上调,11个miRNAs表达量下调。GO富集和KEGG分析表明这48个差异表达miRNAs的靶基因主要参与TGF-β信号通路、mTOR信号通路和p53信号通路等。随机选取9个差异表达的miRNAs,通过qRT-PCR验证,结果与高通量测序结果一致。2 miR-221-3p靶向SOCS5基因促进DTMUV复制的研究（1）miR-221-3p与SOCS5基因的靶向关系验证预测发现SOCS5是miR-221-3p的潜在靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证。结果显示,在模拟剂（mimic）和pmirGLO-SOCS5-Wt共转染的细胞中,荧光素酶活性显著降低（P<0.001）,在抑制剂（inhibitor）和pmirGLO-SOCS5-Wt共转染的细胞中,荧光素酶活性显著升高（P<0.01）,然而在mimic和pmirGLO-SOCS5-Mut以及inhibitor和pmirGLO-SOCS5-Mut共转染的细胞中,荧光素酶活性都没有明显变化（P>0.05）,这就表明miR-221-3p可以与SOCS5的3’-UTR特异性结合。进一步通过qRT-PCR和western blot检测miR-221-3p对SOCS5表达量的影响,发现过表达miR-221-3p,可以使SOCS5的mRNA和蛋白表达量都降低（P<0.01）;抑制miR-221-3p表达后,SOCS5的mRNA和蛋白表达量都升高（P<0.01）。结果揭示:miR-221-3p可以抑制SOCS5的mRNA和蛋白表达。（2）靶基因SOCS5抑制DTMUV复制人工合成SOCS5的shRNA和构建pcDNA3.1（+）-SOCS5重组质粒,转染DEF再感染DTMUV,通过qRT-PCR、western blot和TCID50检测SOCS5对DTMUV复制的影响。结果显示,转染SOCS5-shRNA干扰SOCS5的表达后,病毒拷贝数、病毒E蛋白表达量和病毒滴度均显著升高（P<0.05）;而转染pcDNA3.1（+）-SOCS5过表达SOCS5后,这三项指标均显著降低（P<0.05）。结果表明:过表达SOCS5可以抑制DTMUV复制,敲低SOCS5可以促进DTMUV复制。（3）miR-221-3p通过靶向SOCS5基因促进DTMUV复制将miR-221-3p mimic和inhibitor分别转染DEF再感染DTMUV,通过qRT-PCR、western blot和TCID50检测miR-221-3p对DTMUV复制的影响,发现转染mimic过表达miR-221-3p后,病毒拷贝数、病毒E蛋白表达量和病毒滴度均显著升高（P<0.05）;但是转染inhibitor抑制miR-221-3p表达后,这三项指标均显著降低（P<0.05）。表明:过表达miR-221-3p可以促进DTMUV复制,抑制miR-221-3p可以抑制DTMUV复制。综上所述,本试验发现DTMUV感染DEF会引起48个miRNAs表达量发生变化,其中差异表达显著的miR-221-3p可以通过抑制SOCS5的表达量来促进DTMUV复制。