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目的:探索用羟基磷灰石(HAT)纳米载体经完整圆窗膜渗透途径向内耳转染NT-3基因的可行性;研究在易化剂作用下,圆窗膜对载体-基因复合物的通透性是否有明显提高;观察在易化剂作用下经完整圆窗膜渗透途径向内耳转染NT-3基因的过程对耳蜗结构和听觉功能的影响。方法:选用健康纯白短毛红目豚鼠31只,透明质酸提前处理组(Hya组,7只)、组胺提前处理组(His组,6只)为实验组,以鼓阶钻孔组(Drill组,3只)、脂质体-DNA转染组(Lip组,6只)、直接转染组(PEI-HAT组,6只)和空白对照组(Blank组,3只)作为对照。实验组应用透明质酸/组胺处理完整圆窗膜后,将含有PEI-HAT纳米载体NT-3基因的明胶海绵放置圆窗膜上进行转染。每组术前、术后监测ABR及DPOAE。术后72h处死豚鼠,取外淋巴液、血及脑脊液进行pEGFP-C2-NT3的PCR扩增及产物分析。通过改良的耳蜗基底膜硬铺片法及冰冻切片法在荧光显微镜下观察耳蜗转染后的荧光表达。结果:与经完整圆窗膜途径的转染比较,鼓阶钻孔法对耳蜗的结构和听力的损害稍大。通过对进入外淋巴液中的pEGFP-C2-NT3进行PCR扩增然后电泳检测以判断圆窗膜对载体-基因复合物的通透性,以在外淋巴液中检出pEGFP-C2-NT3的PCR产物为阳性。通过检测脂质体介导NT-3基因经完整圆窗膜转染的通透性,左耳阳性比例为3/6(即6例样本中有3例阳性);用1mg/ml组胺处理圆窗膜后,检测羟基磷灰石纳米粒NT-3基因载体经完整圆窗膜转染的通透性,外淋巴液中未检出,仅在脑脊液中检测到;用9.5mg/ml透明质酸处理圆窗膜后,经电泳检测羟基磷灰石纳米粒NT-3基因载体经完整圆窗膜转染的通透性,测出左耳外淋巴液阳性比例达6/7,对侧耳也有检出,比例为2/6,与鼓阶钻孔法的检测率近似,但大部分显示浓度低,而血液中未检测到。几组脑脊液电泳均显示强阳性条带。结论:(1)经完整圆窗膜渗透途径向内耳转染治疗基因是可行的,而且是一种简便、有效、少创伤的方法;(2)相对于经鼓阶钻孔途径内耳基因转染方法而言,该技术是一种更安全、更适用于人类临床治疗的方法。(3)用透明质酸做易化剂,能有效地增加豚鼠耳蜗圆窗膜的通透性,从而提高外源基因的转染效率。