【摘 要】
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本实验以3日龄SD大鼠颅骨成骨细胞(OB)为研究对象,向传代培养至第三代的OB中分别添加终浓度为0mg/mL(对照组,CG)、0.06mg/mL(低剂量组,LG)、0.12mg/m L(中剂量组,MG)、0.24mg
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本实验以3日龄SD大鼠颅骨成骨细胞(OB)为研究对象,向传代培养至第三代的OB中分别添加终浓度为0mg/mL(对照组,CG)、0.06mg/mL(低剂量组,LG)、0.12mg/m L(中剂量组,MG)、0.24mg/m L(高剂量组,HG)的Al Cl3·6H2O培养24h,采用q RT-PCR技术检测第三代OB中ALP、Col I、TGF-β1、TβR I、TβR II、Smad4、Smad7 m RNA的表达、western blot方法检测TGF-β1、p-Smad2/3、p-ERK、p-JNK、p-p38蛋白的表达,免疫共沉淀法检测p-Smad2/3/4复合物的形成及其入核情况,旨在探讨铝抑制OB的TGF-β1/Smad信号转导机制,结果表明:(1)染铝组大鼠OB中ALP、Col I m RNA表达量均显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),说明Al Cl3抑制OB的活性与功能。(2)染铝组大鼠OB中TGF-β1、TβR I、TβR II、Smad4 mRNA表达量,TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),Smad7 mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),说明Al Cl3抑制OB中TGF-β1/Smad信号通路的转导作用。(3)染铝组大鼠OB中p-ERK、p-JNK、p-p38蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),细胞质和细胞核中p-Smad2/3/4表达量显著低于对照组(P<0.05,P<0.01);各染铝组细胞核中p-Smad2/3/4表达量显著低于细胞质中表达量(P<0.05,P<0.01),而对照组细胞核中p-Smad2/3/4表达量与细胞质中表达量相比差异不显著(P>0.05)。说明Al Cl3通过抑制OB中JNK、ERK、p38的磷酸化,进而抑制p-Smad2/3/4的形成及其转位入核,抑制TGF-β1/Smad信号通路的转导作用。上述结果说明,Al Cl3可抑制大鼠OB中TGF-β1/Smad信号通路的转导及JNK、ERK、p38蛋白的磷酸化,从而抑制p-Smad2/3/4的形成及转位入核,抑制OB中ALP、Col I m RNA表达,产生细胞毒性作用。
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