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目的卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中的发生率排在第三位,病死率位居首位,且发病率逐年上升。卵巢癌细胞活性较强,转移速度快,缺乏特异性的症状和体征,早期准确的分子标志物预警较少,诊断困难。紧密连接蛋白家族claudins属于膜蛋白家族,是构成细胞紧密连接(tight junctions,TJs)的重要组成成分之一。claudins在多种疾病中均出现表达异常,且与子宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌等妇科肿瘤的发生发展密切相关。目前研究认为claudin-6在卵巢癌病理组织中高表达,提示claudin-6可能在卵巢癌中有表达差异。通过检测claudins的表达水平和细胞空间定位,可使其作为诊断和预测妇科恶性肿瘤预后的实用指标。本课题拟从细胞水平探索claudin-6在卵巢癌中的表达水平,进一步揭示过表达claudin-6对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学特性的影响,从基因、蛋白水平验证claudin对卵巢癌细胞进展转归的作用,为进一步探索claudin-6在卵巢癌进展中的作用和机制奠定基础。方法1.荧光定量 PCR 法和 Western Blot 检测 claudin-6 在 SKOV3、A2780 和OVCAR3卵巢癌细胞株,以及IOSE80卵巢正常上皮细胞株中的表达量:2.构建过表达claudin-6的真核表达质粒pEGFP-N1-CLDN6,并转染SKOV3细胞;3.过表达claudin-6的卵巢癌SKOV3细胞的Western Blot鉴定与细胞免疫荧光鉴定;4.CCK8法和二维三维克隆形成实验检测claudin-6过表达对SKOV3细胞增殖能力的影响;5.细胞划痕和Transwell实验检测claudin-6过表达对SKOV3细胞迁移、侵袭能力的影响;6.流式细胞仪检测claudin-6过表达对SKOV3细胞凋亡的影响;结果1.claudin-6 在 A2780、SKOV3、OVCAR3 卵巢癌细胞株和 IOSE80 正常卵巢上皮细胞株中均有表达,在SKOV3细胞株中表达量较高。2.构建并鉴定了表达EGFP荧光蛋白的pEGFP-N1-CLDN6质粒,测序结果符合设计预期。3.在SKOV3细胞中转染pEGFP-N1-CLDN6质粒,G418筛选过表达细胞株,通过荧光显微镜挑取、Western blot法筛选出过表达claudin-6的SKOV3单克隆细胞株。细胞免疫荧光染色后,在细胞膜及核膜上可见claudin-6的分布。4.CCK8实验、二维克隆形成实验和三维克隆形成实验显示,过表达claudin-6的SKOV3细胞增殖速度、克隆形成能力较空载组细胞及未转染细胞显著增强。5.划痕实验及Transwell实验结果显示过表达claudin-6显著增强SKOV3细胞的迁移和侵袭。6.流式细胞仪结果显示过表达claudin-6对卵巢癌SKOV3细胞有凋亡抑制作用结论1.Claudin-6在SKOV3和OVCAR3卵巢癌细胞株中高表达,在A2780卵巢癌细胞株和IOSE80卵巢正常上皮细胞株中表达量较低;2.过表达claudin-6促进卵巢癌SKOV3细胞增殖;3.过表达claudin-6增强卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力;4.过表达claudin-6对卵巢癌SKOV3细胞有凋亡抑制作用。