血小板激活相关miRNA在蒙药齐顺保利尔治疗原发免疫性血小板减少症中的调控机制研究

来源 :内蒙古民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dsmhjs
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目的:基于蒙药复方制剂齐顺保利尔,已经在血液指标、凝血功能、血清因子、病理、毒理、临床观察及miRNA调控、蛋白组学等分子生物学机制研究方面取得了一定的成果,并为进一步探索研究基于修饰、调控、信号通路等层面的研究提供依据。方法:自2016年6月至2018年3月期间在内蒙古民族大学附属医院就诊的来自内蒙古东部地区新诊断的符合诊断标准的成人慢性ITP患者和正常体检人各30例ITP。通过对ITP患者用蒙医辩证施治方法齐顺保利尔为主制剂,实施治疗2个月,评价蒙药复方制剂齐顺保利尔的治疗效果,收集ITP患者及健康体检人外周血的白细胞,采用Taqman法实时定量PCR检测验证。并跟前期研究结果进行比对,分别从分子功能,生物过程和细胞组成三个方面对基因功能进行描述,将预测得到的靶基因基于NovelBio数据库进行GO注释,得到基因参与的所有GO,T检验算出每个GO的显著性水平,统计每个GO条目中所包括的靶基因个数,对每个GO条目中的靶基因富集显著性进行统计学分析。再用KEGG数据库对预测得到的靶基因进行信号通路分析,计算每个基因功能条目中差异基因富集的显著性。得到的结果分析之后制作miRNA与靶基因的相互作用网状图。结果:疗效评价结果显示:各试验组中蒙药齐顺保利尔治疗后显著改善,治疗后血小板计数显著提高,无出血等现象,实验治疗前后血小板计数有显著差异,(P<0.05)。而治疗后与健康人,血小板计数无显著差异,证明蒙药齐顺保利尔治疗ITP有显著疗效,趋于健康人。Rt-qPCR结果显示:Rt-qPCR扩大样本量验证的结果与前期qPCR差异表达的miRNA结果相吻合。验证了qPCR结果的可靠性。生物信息学分析结果显示:我们通过对应用蒙药齐顺保利尔治疗ITP后的相关显著性差异表达的miRNA进行靶基因预测,信号通路分析,治疗前后上调组的miRNA得到138条基因功能条目,治疗前后下调组的miRNA得到79条基因功能条目,健康对照与ITP组上调的miRNA得到66条基因功能条目,健康对照与ITP组下调的miRNA得到39条基因功能条目,健康对照与治疗后组上调的miRNA得到102条基因功能条目,健康对照与治疗后组下调的miRNA得到68条基因功能条目。靶基因方面六组共找到2142个相关靶基因,其中在各组中免疫系统相关及免疫应答相关的靶基因数目较多,有此可发现在治疗前后差异表达的miRNA相关的靶基因通过调控免疫系统及免疫应答系统来发挥作用。为进一步探索ITP的发病及治疗机制提供新思路,为蒙药齐顺保利尔治疗原发免疫性ITP提供从分子水平上提供科学的依据,对蒙药齐顺保利尔的疗效进行分子生物学方面、疗效机制方面的完善评价。结论:本研究对蒙药齐顺保利尔治疗原发免疫性血小板减少症的差异表达的miRNA进行了疗效评价、qPCR实验验证,并对验证结果进行基因功能分析,靶基因预测,信号通路分析,制作miRNA与靶基因的相互作用网状图。通过疗效评价证明蒙药齐顺保利尔治疗ITP有效率为83%。研究分析发现细胞凋亡正调控相关的生物过程及血管形成,血小板激活等生物过程。本研究中关于miRNA及其靶基因间的相互关系与蒙药齐顺保利尔治疗ITP及各类血液病仅限于生物信息学方面的分析,其他基因功能研究方面还需要进一步地深入。
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