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【目的】本研究以在乳腺癌转移过程中发挥重要作用的PHD2/TGF-β1/CAF路径为切入点,选择乳腺癌肺转移裸鼠模型为研究对象,在验证阳和汤抗乳腺癌肺转移效应的基础上,观察其不同剂量给药对肿瘤微环境相关分子PHD2、HIF-1α、TGF-β1、CAF的影响,从改善肿瘤周围微环境的角度深入探讨阳和汤干预乳腺癌肺转移的作用机制。【方法】1.乳腺癌肺转移裸鼠模型的建立:于裸鼠右侧胸壁第二对乳腺脂肪垫接种0.2ml人乳腺癌MDA-MB-231细胞悬液(浓度为5×10~7/ml)。观察肿瘤细胞增殖情况,当增殖为肉眼可见时即造模成功。通过病理切片观察组织形态评价模型的有效性。2.阳和汤干预裸鼠成瘤及肺转移研究:将造模成功的30只裸鼠随机分为6组,分别为:模型组、阳性组、阳和汤高剂量组、阳和汤中剂量组、阳和汤低剂量组和空白组,每组6只。连续给药21天后取瘤、取肺。石蜡组织切片观察裸鼠肺部转移灶情况。绘制裸鼠体重变化曲线、原位瘤生长曲线,计算原位瘤抑瘤率。3.阳和汤干预乳腺癌与调节PHD2、HIF-1α、TGF-β1、CAF的关系:取裸鼠原位瘤组织,制作石蜡切片,免疫组化法检测PHD2、HIF-1α、CAF的表达;Real-time PCR法检测阳和汤对原位瘤组织中TGF-β1表达的影响。4.阳和汤干预乳腺癌肺转移与调节PHD2、HIF-1α、TGF-β1、CAF的关系:取裸鼠肺组织,制作石蜡切片,免疫组化法检测PHD2、HIF-1α、CAF的表达;Real-time PCR法检测阳和汤对肺组织中TGF-β1表达的影响。【结果】1.造模成功,成瘤率100%。乳腺癌原位瘤均位于裸鼠右侧第二乳头下方,边界清楚,形状规则,触诊活动度尚可,包膜完整,部分出现粘连。取材时观察到,原位瘤成鱼肉色,质韧,切开后中心存在灰色坏死组织。原位瘤组织与肺组织HE染色均可查见肿瘤。2.乳腺癌原位瘤组织HE染色均可查见肿瘤;肺组织HE染色除空白组、阳性组外,均可查见肿瘤。绘制原位瘤生长曲线,各组原位瘤抑瘤率分别为阳性组(51.44%)、阳和汤高剂量组(18.16%)、阳和汤中剂量组(26.37%)、阳和汤低剂量组(9.22%)。3.药物干预后,裸鼠原位瘤中各指标表达情况如下:与模型组比较,阳性组PHD2明显升高,差异极显著(P<0.01),阳和汤中剂量组PHD2表达升高,差异显著(P<0.05)。与模型组比较,阳性组HIF-1α表达显著降低,差异极显著(P<0.01),阳和汤中剂量组HIF-1α表达降低,差异显著(P<0.05)。与模型组比较,阳性组α-SMA明显降低,差异极显著(P<0.01)。与模型组比较,阳性组TGF-β1mRNA明显降低,差异极显著(P<0.01)。4.药物干预后,裸鼠肺组织中各指标表达情况如下:与空白组比较,模型组、阳性组、阳和汤高剂量组、阳和汤中剂量组、阳和汤低剂量组PHD2明显减少,差异极显著(P<0.01);与模型组相比,阳性组、阳和汤中剂量组PHD2明显减少,差异极显著(P<0.01),阳和汤低剂量组PHD2减少,差异显著(P<0.05)。与空白组比较,模型组HIF-1α明显增高,差异极显著(P<0.01),阳性组、阳和汤高剂量组、阳和汤中剂量组、阳和汤低剂量组HIF-1α增高,差异显著(P<0.05);与模型组相比,阳性组HIF-1α减少,差异显著(P<0.05)。与空白组比较,模型组、阳性组、阳和汤高剂量组、阳和汤中剂量组、阳和汤低剂量组α-SMA明显减少,差异极显著(P<0.01);与模型组相比,阳性组α-SMA明显减少,差异极显著(P<0.01),阳和汤中剂量组α-SMA减少,差异显著(P<0.05)。与空白组比较,模型组、阳和汤高剂量组、阳和汤低剂量组TGF-β1mRNA明显增多,差异极显著(P<0.01);阳性组、阳和汤中剂量组TGF-β1mRNA增多,差异显著(P<0.05)。与模型组相比,阳性组、阳和汤中剂量组TGF-β1mRNA减少,差异显著(P<0.05)。【结论】1.阳和汤抑制乳腺癌原位瘤的生长,是通过提高裸鼠原位瘤组织PHD2表达、降低HIF-1α表达,干预低氧微环境实现其治疗效应的。而阳和汤对TGF-β1、α-SMA(CAF)表达量无显著影响表明阳和汤不通过调控TGF-β1、α-SMA干预乳腺癌原位瘤。2.阳和汤抑制乳腺癌肺转移瘤浸润,是通过降低裸鼠肺组织TGF-β1、α-SMA(CAF),干预炎症微环境。而阳和汤对HIF-1α表达量无显著影响表明阳和汤不通过调控HIF-1α干预乳腺癌肺转移。