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目的:青光眼是全球第二位的致盲性眼病。如何阻止视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)的凋亡,保护视功能是当前青光眼治疗的首要任务。除了眼压升高的机械压迫机制,视神经乳头缺血是青光眼视神经病变的病理机制之一,最具有代表性的是正常眼压性青光眼(normal tension glaucoma, NTG)的视神经损害。本研究针对血管学说应用血管收缩因子内皮素-1(endothelin-1, ET-1)建立兔慢性视神经损害模型,并探讨新型α2-受体激动剂——0.2%酒石酸溴莫尼定(0.2% brimonidine tartrate, BMD; Alphagan)对这种模型是否具有视神经保护作用。方法:1实验动物及分组:本实验共分四组,首先将28只成年健康纯种新西兰大白兔(雌雄兼用)随机分为A,B两组,两组内右眼定为模型眼A1组和B1组,分别与之对应的左眼定为对照眼A2组和B2组,每组14只眼。2实验方法:动物表麻下(0.5%盐酸丙美卡因滴眼液),应用30-G微量注射器玻璃体腔注药,A1组和B1组注入ET-1(10?6 M, 20μl),A2组和B2组注入0.9%氯化钠注射液20μl,每周注射2次,连续4周。B1组和B2组给予0.2%酒石酸溴莫尼定滴眼液点眼,1滴/12小时直至取标本。3眼压测量:注药前1天、注药后7天、14天、28天及42天各组均测量眼压并记录。4闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测:注药前1天、注药后14天、28天及42天通过F-VEP评定视神经的损伤情况。观察指标为F-VEP的P1波潜伏期LP1(ms)。5病理组织学观察:于28天全麻下随机摘取各组各7只眼球,余下者42天全麻下摘取,固定,视网膜组织制成石蜡切片做HE染色,光镜下观察视网膜组织的病理变化;做TUNEL染色,光镜下观察计数神经节细胞层5个高倍视野TUNEL染色阳性细胞的数量且作统计学分析。6电镜观察:分别于28天、42天在摘取的各组眼球中每组分别随机选取2只眼紧贴眼球切取球后1mm处视神经固定,制成环氧树脂超薄切片,经铅铀染色,透射电镜下观察视神经轴突的超微结构改变。结果:1眼压:各组初始眼压无显著性差异(P>0.05)。B1组、B2组眼压在注药后7天开始降低,42天时降至最低水平,均值分别为(15.93±1.10mmHg, 15.54±1.01mmHg)。双因素方差分析A1组与B1组眼压差异性显著(P<0.01),具体结果为从注药14天开始差异性显著,持续至42天。A1组与A2组的眼压及B1组与B2组的眼压各时间点均无明显差异(P>0.05)。2 F-VEP P1波潜伏期LP1变化情况:各组初始LP1无显著性差异(P>0.05)。A1组LP1于注药后14天开始逐渐延长,并持续至42天,最大值出现在28天,均值为47.86±3.07ms。然而B1组LP1相对稳定,A2组、B2组LP1在各时间点无明显改变。双因素方差分析A1组与A2组的LP1及A1组与B1组LP1差异显著(P<0.01),具体结果为分别从注药14天开始差异性显著,并持续至42天。而B1组与A2组LP1及B1组与B2组LP1无明显差异(P>0.05)。3组织学观察3.1 HE染色:A2组和B2组在注药后28、42天兔眼视网膜各层组织清晰可见,细胞排列整齐均匀,层次分明,无组织坏死及细胞变性。A1组视网膜较对照组视网膜神经节细胞数目明显减少,细胞出现变性。在各时间点A1组较B1组视网膜神经节细胞数明显减少。3.2 TUNEL染色:A2组和B2组在注药后28、42天未发现细胞核成棕黄色的阳性细胞。注药28天时RGC层各组阳性细胞数有显著性差异(P<0.05),其中A1组与其他三组有差异,B1与其他三组有差异,A2组与B2组无明显差异。注药42天时A1组与A2组、B1组、B2组均有差异,后三组之间无明显差异。4透射电镜观察:注药后28天、42天A2组和B2组视神经髓鞘完整,轴浆均匀,轴浆内可见清晰的微丝、微管和线粒体等细胞器。注药28天A1组可见视神经轴突髓鞘结构紊乱,轴索变性,细胞器减少,可见线粒体空泡化,双层膜结构和嵴均消失,轴突之间可见胶质细胞。B1组视神经轴突髓鞘排列较整齐,可见微丝、微管等细胞器结构。注药42天A1组可见视神经轴突髓鞘结构紊乱,轴索变性,细胞器更少见。B1组较28天时无明显变化。结论:1通过玻璃体腔注射ET-1可以诱导兔视网膜神经节细胞的凋亡和视神经功能损伤的模型。2玻璃体腔注射ET-1 (10?6 M, 20μl) ,每周两次,共四周对眼压无影响。3酒石酸溴莫尼定滴眼液除可以降低眼压外,还可以减轻由ET-1诱导的兔视网膜神经节细胞的凋亡和视功能的损伤。