目的1.探讨胆道闭锁(Biliary atresia,BA)患儿Kasai手术后自体肝的形态及结构改变,分析其与Kasai术后肝脏损伤程度及胆管炎之间的关系;2.研究胆道闭锁患儿的自体肝组织细胞表面糖蛋白14(CD14),血管内皮生长因子34(CD34),转化生长因子β1(TGF-β1)在肝组织中的表达,及其在肝纤维化中的作用。方法1.收集2012年5月至2013年12月期间天津市第一中心医院胆道闭锁患儿Kasai术后行肝移植手术的自体肝脏标本16例为实验组,其中男10例,女6例,同时收集天津市儿童医院16例胆道闭锁患儿行Kasai手术时肝脏活检标本为阳性对照组,其中男11例,女5例。观察胆道闭锁患儿Kasai术后肝脏病理变化特点,并简单分析对胆管炎发生的影响。采用HE和免疫组化技术等检测肝脏纤维化程度、胆管及血管的增生情况、肝细胞损伤情况以及炎症细胞的浸润情况,观察Kasai术后病理改变。2.选取2013年1月至2014年1月天津市儿童医院BA患儿术中肝活检标本(Kasai组)、天津市第一中心医院BA患儿接受肝移植自体肝组织(移植组)、天津市儿童医院胆管扩张症患儿术中肝活检标本(扩张组,作为对照组),每组15例,术中留取肝组织。进行HE及免疫组化染色检测三种蛋白在肝组织中表达及组织定位情况,分析其与肝纤维化之间的关系。应用图像分析软件(Image-Pro-Plus)分别计算CD14,TGF-β1积分光密度值(IOD),CD34阳性表达面积(Area),SPSS17.0软件统计分析CD14,TGF-β1,CD34之间表达差异及其相关性。结果1.实验组中生后出现黄疸时间为0~15天,行Kasai手术时间为44~105天,出现胆管炎的频次为1~6次,肝移植距离Kasai手术后时间5~67月。阳性对照组中肝活检的肝脏标本外观普遍增大,淤胆严重,质地中等;HE和免疫组化结果显示肝脏纤维化分级介于II~IV级之间,汇管区胆栓情况介于0~I级之间,汇管区血管增生情况介于III~IV级之间,胆管增生介于I~III级之间。实验组中肝脏外观多数呈现部分段、叶萎缩情况,也有部分肝脏标本呈现肥厚改变;肝脏纤维化分级都属于IV级,汇管区胆栓情况I-II级之间,汇管区血管增生情况IV级,胆管增生III~IV级之间。2.CD14表达于肝髓窦内皮细胞,成纤维细胞,炎细胞;TGF-β1表达于成纤维细胞、胆管上皮细胞、炎细胞;CD34表达于汇管区血管内皮细胞。与对照组比较,实验组三种蛋白表达增加,从肝纤维化I级至IV级中,CD14、TGF-β1蛋白表达量呈逐渐下降趋势,CD34表达逐步增多。实验组中三种蛋白在肝组织表达差异有统计学意义(P<0.05),其中CD14与TGF-β1肝组织表达相关性显著,TGF-β1、CD34肝组织表达呈正相关(P<0.01)。结论1.胆道闭锁患儿Kasai术后肝脏损伤受Kasai手术时间影响,早期行Kasai术肝组织血管/胆管增生不明显,肝小叶有轻微淤胆;手术较晚的患儿肝脏胆汁淤积严重,假小叶、桥接纤维化,胆管增生明显。胆道闭锁Kasai术后接受肝移植的患儿终末期肝脏纤维化及淤胆严重,胆管,血管增生严重,汇管区增宽,炎细胞浸润灶。2.BA肝纤维化进展期CD14,TGF-β1表达逐渐增加,参与BA肝纤维化过程,并对BA肝硬化形成起到推动作用。TGF-β1与CD34在三组肝组织中显著正相关,可能在纤维化中相互作用,在纤维化进展中起到一定的作用。到移植终末期,各种细胞缺失,纤维组织增多,三组蛋白表达逐渐下降。