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[目的]本实验选取结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli, APC)和Wilms肿瘤基因1(Wilms’tumor gene1, WT1)两种抑癌基因作为研究对象,通过检测乳腺癌发生不同阶段中APC基因和WT1基因启动子的甲基化状态及乳腺浸润性导管癌组织mRNA表达水平,了解这两种目的基因的甲基化与乳腺癌发生发展的关系,分析目的基因启动子甲基化与其mRNA表达的关系,探讨APC基因异常甲基化与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系,为乳腺癌的早期诊断、预防和治疗提供理论依据。[方法]选取解放军昆明总医院病理科2010-2011年外科手术切除乳腺标本,根据2006年WHO乳腺肿瘤病理诊断标准对上述标本进行HE读片以核定诊断,其中包括46例浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma, IDC)、20例原位导管癌(ductal carcinoma in situ, DCIS)、13例非典型导管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)、27例普通型导管增生(usual ductal hyperplasia, UDH)和17例正常乳腺组织(normal breast tissue, NBT)。1、使用商品试剂盒提取所有新鲜或石蜡组织标本的基因组DNA,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测APC和WT1基因启动子甲基化状态,并使用Quantity One软件定量分析每例原发病变中APC和WT1基因的甲基化水平。2、根据患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、PR、HER-2等临床病例资料将46例乳腺浸润性导管癌样本进行分组,比较不同组别之间的甲基化状态。3、使用TA克隆的方法对MSP产物进行测序分析。4、应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)方法检测26例乳腺浸润性导管癌组织中APC和WT1基因的mRNA相对表达水平,并分析基因甲基化对mRNA表达的影响。[结果]1、在NBT、 UDH、 ADH、 DCIS及IDC中,APC基因的甲基化率分别为：0%(0/17)、0%(0/27)、69.23%(9/13)、90.00%(18/20)及80.43%(37/46),其中NBT与ADH、 NBT与DCIS、 NBT与IDC、 UDH与ADH、 UDH与DCIS、UDH与IDC之间APC甲基化率差别有统计学差异,P<0.05；其余各组之间的甲基化率无显著统计学差异,P>0.05。在ADH、 DCIS及IDC中,APC基因的甲基化水平分别为：0.070±0.147、0.298±0.496、0.557±0.306。ADH和DCIS两组的甲基化水平与IDC组的甲基化水平存在显著统计学差异,P<0.05；ADH和DCIS之间的甲基化水平无显著统计学差异,P>0.05。2、APC基因甲基化与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、 PR、 HER-2等临床病理资料无关。3、 APC mRNA在乳腺浸润性导管癌组织中相对表达水平的中位数0.0587750,显著低于其在癌旁正常乳腺组织的相对表达水平,P<0.05；在乳腺浸润性导管癌样本中,甲基化组APC mRNA相对表达水平的中位数0.0482350,非甲基化组APC mRNA相对表达水平的中位数0.3099850,两者之间经统计学检验存在显著差异,P<0.05。乳腺浸润性导管癌中APC基因甲基化与APC mRNA表达呈负相关(r=-0.469,P<0.05)。4、在NBT、 UDH、 ADH、 DCIS及IDC中,WT1基因的甲基化率分别为：0%(0/17)、0%(0/27)、38.46%(5/13)、45.00%(9/20)及0%(0/46),其中NBT与ADH、 NBT与DCIS、 UDH与ADH、 UDH与DCIS、 IDC与ADH、 IDC与DCIS之间WT1甲基化率差别有统计学差异,P<0.05；其余各组之间的甲基化率无显著统计学差异,P>0.05。在ADH和DCIS中,WT1基因的甲基化水平分别为：0.076±0.674、0.242±0.285,两组之间无显著统计学差异,P>0.05。5、 WTl mRNA在乳腺浸润性导管癌组织中相对表达水平的中位数3.5621700,显著高于其在癌旁正常乳腺组织的相对表达水平,P<0.05。[结论]1、APC基因在NBT和UDH、 ADH和DCIS、 IDC样本中的甲基化程度逐渐升高,提示APC基因启动子异常高甲基化在乳腺癌发生发展过程中起着重要作用。2、乳腺浸润性导管癌中APC基因甲基化与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、 PR、 HER-2等各项临床病理资料无关。3、在乳腺浸润性导管癌样本中,APC基因的mRNA表达量与其甲基化程度表现为负相关的关系,提示APC基因启动子高甲基化是导致其基因失活的重要机制之一。4、WT1基因在NBT和UDH中未发现甲基化,而在ADH和DCIS两种病变中呈高甲基化状态,提示WT1基因启动子异常高甲基化在乳腺癌发生的早期阶段中发挥重要作用。5、在IDC组中WT1基因未发现高甲基化,且WT1mRNA在绝大多数样本中高表达,两者综合分析后提示WT1基因的低甲基化促进了其mRNA的表达,该基因可能在乳腺癌发生过程中可能发挥癌基因的作用。