论文部分内容阅读
目的:探讨Lmo4在胃癌和癌旁组织、不同胃癌细胞株中的表达差异,阐明Lmo4在胃癌发生发展中的作用及机制,为胃癌的分子诊断与靶向治疗提供新思路。方法:应用q RT-PCR和免疫组织化学,检测90例胃癌患者的癌组织及对应癌旁组织中Lmo4mRNA的表达差异,分析Lmo4表达与胃癌临床病理因素的相关性。采用Western blot方法比较不同人胃癌细胞株中Lmo4的表达,筛选高表达和低表达细胞。通过RNA干扰技术抑制BGC-823胃癌细胞中Lmo4的表达,应用平板克隆形成实验、Transwell迁移实验、划痕试验、CCK8实验及Western blot方法检测Lmo4被沉默后对胃癌细胞的生长迁移能力及细胞通路(Vimentin通路、MMP9通路、TGF-β通路、AKT通路、β-Catenin通路)的影响。用pcDNA构建过表达Lmo4质粒Lmo4-pcDNA,并通过Western blot检测其对胃癌细胞增殖、迁移、凋亡及EMT相关蛋白的影响,运用细胞周期试验评价Lmo4过表达后增殖情况。以细胞计数、平板克隆形成实验和Transwell迁移实验评价胃癌细胞生长和迁移能力的变化。结果:q RT-PCR结果显示胃癌组织中Lmo4相对表达量明显高于对应的癌旁组织(P<0.001),且Lmo4在胃癌组织中的表达与肿瘤的分型有关(P<0.001)、浸润程度有关(P<0.001),而与年龄、性别、肿瘤大小无关。免疫组化结果发现Lmo4基因特异性表达于胃癌细胞(胞浆与胞核),而在癌旁组织或肠化生组织中未见其表达。高表达Lmo4的BGC-823胃癌细胞迁移能力显著强于低表达Lmo4的MGC-803胃癌细胞。沉默Lmo4后的细胞的迁移能力显著减弱,细胞克隆形成数量减少,促进了细胞凋亡,抑制EMT发生,使E-cadherin表达升高,TWIST、N-cadherin、Vimentin表达降低;Lmo4过表达在体外促进胃癌细胞生长和迁移,抑制了细胞凋亡;促进EMT的发生,使E-cadherin表达降低,TWIST、N-cadherin、Vimentin表达升高。结论:Lmo4在胃癌的发生、进展中具有重要作用,可能通过诱导胃癌细胞发生EMT而促进胃癌的转移。Lmo4不仅可作为胃癌分子诊断一个新的分子标志,而且可能成为治疗胃癌的一个新的靶标。