γ-聚谷氨酸的异源表达及发酵工艺研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jeff2001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
聚-γ-谷氨酸是一种由D-谷氨酸和L-谷氨酸单体通过γ-羧基与α-氨基形成的肽键缩合而成的一种聚阴离子类多肽分子。其分子量一般在100~1000kDa之间,相当于500~5000个左右的谷氨酸单体。作为一种生物高分子材料,γ-PGA具有生物可降解性好、可食、对人体和环境无毒害的优点。目前已经确定编码γ-PGA合成酶系的全部基因(pgsB、pgsC、pgsA)。本论文以大肠杆菌和谷氨酸棒状杆菌为宿主进行γ-PGA的异源表达研究。从Bacillus subtilis ZJU-7中克隆得到了pgsB、pgsC、pgsA三个基因,采用了pTrc99a和pXMJ19两种质粒作为载体,分别构建了pTrc99a-pgsBCA和pXMJ19-pgsBCA两个重组表达质粒。选取E.coli JM109、E.coli BL21、Corynebacterium glutamicum RES167为宿主,分别构建了E.coliJM109/pTrc99a-pgsBCA、E.coli BL21/pXMJ19-pgsBCA、Corynebacteriumglutamicum RES167/pTrc99a-pgsBCA、Corynebacterium glutamicumRES167/pXMJ19-pgsBCA共4个重组菌株。并且对各个重组菌株的γ-PGA合成能力进行了鉴定。其中E.coli JM109/pTrc99a-pgsBCA、E.coli BL21/pXMJ19-pgsBCA、Corynebacterium glutamicum RES167/pXMJ19-pgsBCA具备了γ-PGA的合成能力。并且对E.coli BL21/pXMJ19-pgsBCA的培养条件进行了优化。得到了以下的培养基成分:蔗糖10g/L,蛋白胨10g/L,L-谷氨酸10g/L,NaCl10g/L,1mM MnSO4,氯霉素34μg/ml,IPTG 1mM。使用以上的培养基配方,γ-PGA的产量达到了1.17g/L。对本实验室保藏的一株聚-γ-谷氨酸高产菌株(Bacillus subtilis ZJU-7)进行了复壮,从中筛选出一株相对高产的菌株,摇瓶发酵产量达到48 g/L。并且对Bacillus subtilis ZJU-7进行了摇瓶培养条件优化。在此基础上,在15L发酵罐上对发酵过程进行了初步的放大研究,γ-PGA产量达到了23 g/L。针对Bacillus subtilis ZJU-7发酵过程中需要添加大量的蛋白胨引起发酵成本过高的问题,进行了Bacillus subtilis ZJU-7发酵培养基中氮源替代的初步研究,考察了鱼粉、玉米粉等廉价氮源对γ-PGA产量的影响。当使用玉米粉作为氮源时,培养基中氮源成本最低,达到5元/kgγ-PGA。
其他文献
本文利用粉末冶金法制备了添加复合润滑剂镍包覆石墨和氟化钙的铁基固体自润滑材料,通过XRD和SEM分析了其微观组织,用SRV高温摩擦磨损试验机测试了摩擦学性能,并测试了材料的
  睡眠是人类生存必需的重要过程,睡眠的好坏与人的身心健康和生活质量密切相关,是机体生命活动必需的生理过程,维持正常的快慢波睡眠对恢复疲劳、机体的精神与体力意义重大。
本文系统地研究了气泡在磁性流体中的宏观动力学特性。用PLIC-VOF方法追踪气泡的自由界面,CSF方法计算表面张力。 (1)考察了Mo数及E(o)数对气泡运动与变形的影响,发现气泡的
  目的 探讨便秘病人围手术期的心理护理要点。方法 对便秘病人围手术期进行积极有效的心理护理。结果 通过心理护理,使病人顺利接受手术并在术后得到了良好恢复。结论 对围
本文以廉价二氧化锰作为电化学电容器的电极材料,采用TG-DAT,XRD,SEM等多种现代物理测试手段和电化学研究方法研究了二氧化锰材料的制备、电容特性及各种影响因素。主要研究内容如下:首次提出采用多种阴离子还原剂与氧化剂高锰酸钾反应制备超级电容器的电极材料MnO_2,为合成同类物质提供了一种行之有效的参考方法。通过化学沉淀法制备电极样品,利用各种测试手段,研究了不同反应试剂对所制备的超级电容器二氧
  ICU 是集中救治危重病人的场所。其特点是病人病情危重,复杂多变,需要工作人员急救知识广泛,能应用多种监护、抢救仪器和设备,对病人进行严格的监护,是一个高风险科室[1]。出
  便秘的病因包括排便动力缺乏,肠黏膜正常的敏感性降低,精神神经因素,肠道内容物前进受阻,整个胃肠道运动缓慢等。便秘的危险性包括对心脑血管疾病的影响、自身中毒、肛周感染
  目的:总结5 例复杂性肛周化脓性汗腺炎手术患者的护理心得方法:5 例患者均系复杂性肛周化脓性汗腺炎,并行手术治疗,总结分析临床资料及护理体会结果:5 例患者彻底治愈,术后均无