乳腺炎是一种奶牛中常见的传染性疾病,其影响范围广且容易复发。病原微生物感染乳腺,释放脂多糖（LPS）等大分子物质刺激免疫反应,引发乳腺炎。乳腺炎的发生不仅损害奶牛的健康,导致奶牛淘汰增加、生产寿命减少、治疗费用增加,还会引起产奶量减少,乳品质下降,造成经济损失。因此,奶牛乳腺炎的预防和治疗至关重要。鱼腥草（H.cordata）是一种传统的中草药,被广泛应用于临床治疗。已有研究表明,鱼腥草具有抗菌、抗氧化、抗炎等多种生物活性。但鱼腥草成分复杂,导致其质量和剂量控制困难导致应用受到限制。甲基正壬酮（MNK）作为鱼腥草水蒸气提取物中的主要挥发油成分,其性质稳定,且也有研究证明其具有抗炎和抗氧化作用。因此本研究诣在探究鱼腥草甲基正壬酮对LPS诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应和氧化应激的影响及机制。本研究选用脂多糖处理奶牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）来模拟奶牛乳腺炎的炎症模型,并外源性添加甲基正壬酮,探究甲基正壬酮对LPS引起的细胞炎性和氧化损伤的保护作用。结果显示,用50、100、200μg/ml的LPS处理MAC-T细胞显著地降低了细胞活力,而1、10、15μg/ml的MNK显著增强了细胞的活力。通过CCK8法筛选了100μg/ml LPS处理MAC-T细胞建立炎症模型,10μg/ml MNK培养24 h作为发挥保护作用的最适处理条件。添加10μg/ml的MNK预处理4 h可以显著逆转LPS诱导的MAC-T细胞活力的下降。同时,添加MNK还可以显著抑制LPS诱导的炎性细胞因子,如IL-1β、IL-6、IL-8、TGFβ、TNF-αmRNA表达量的上升。通过Western blotting检测炎症相关蛋白的表达水平,结果显示MNK抑制了LPS引起的IL-6、TNFα、TNFR1和TGFβ蛋白水平的上调。为了进一步探究MNK发挥抗炎作用的机制,本研究观察了MNK对LPS诱导的TLR4、MYD88、NF-κB信号通路的影响。MNK抑制了TLR4、MYD88的蛋白表达和p65的磷酸化,降低了NF-κB的mRNA水平。结果表明MNK通过抑制LPS诱导的TLR4-NF-κB信号通路的激活和炎症因子的下游信号传导,来减少促炎细胞因子的产生及其作用。此外,检测细胞活性氧（ROS）水平,发现MNK预处理可以有效降低LPS诱导的ROS产生。进一步探究MNK缓解氧化应激的机制,发现MNK激活了AKT和ERK通路,并增加Nrf2蛋白表达,进而促进抗氧化酶（HO-1）表达,减缓了LPS诱导的氧化损伤。同时,MNK还可能通过Nrf2途径使细胞内ROS水平降低来抑制NF-κB通路的激活,进而发挥抗炎作用。综上所述,本研究发现,MNK预处理通过抑制TLR4-NF-κB通路,激活Nrf2通路抑制ROS产生,从而保护MAC-T细胞免受LPS诱导的炎症反应和氧化损伤的影响。这说明MNK能够有效抵御LPS对奶牛乳腺上皮造成的细胞损伤,可能为奶牛乳腺炎治疗有效候选药物的筛选提供理论支持。