中药作为连接祖国医学和临床实践的桥梁,其药效物质的获取,不可避免地需要“去伪存真,去粗取精”,因而“分离”是中医药领域的关键技术。而采用怎样的工业化技术,如何合理评价分离的效果,是当前面临的一个重要问题。大孔树脂吸附是利用一类有机高聚物吸附剂吸附溶液中有效成分的方法,在中草药有效成分的提取分离方面较其他分离手段已显示出其独特的作用。而采用树脂组合的方式,突破单一树脂对复方某一种(类)成分的选择性吸附局限,实现多成分的群集最优分离,对于探索现代分离技术对中药复杂体系的适宜性,实现中药复方的等效分离,具有重大意义。本论文选择物质基础研究较多、对脑缺血损伤有明确药理作用的经典方——黄连解毒汤为研究对象,在前期研究的基础上,采用大孔吸附树脂组合精制的方法获取其抗脑缺血有效部位,并在“方证对应”理论指导下对此有效部位开展了药动-药效学(PK-PD)研究,通过构建整合PK-PD模型,评价有效部位的药动学与药效学相关性,为黄连解毒汤的临床合理用药及剂型改进奠定实验基础。研究目的:探索黄连解毒汤的大孔树脂组合精制条件,实现复方的最优分离方法;基于“方证对应”机理,研究黄连解毒汤有效部位中主要成分在脑缺血模型和正常大鼠体内的药代动力学和药效动力学差异,为黄连解毒汤的合理用药和临床应用提供参考。研究内容:1)采用大孔吸附树脂及组合精制黄连解毒汤复方水提液,获取各组精制产物;通过细胞药效学筛选,获得黄连解毒汤抗脑缺血有效部位。2)黄连解毒汤抗脑缺血有效部位中主要成分中小檗碱、巴马汀、黄芩苷和栀子苷在脑缺血模型和正常大鼠体内的药代动力学和抗自由基氧化药效动力学研究。研究方法:1)采用X-5等1 1种不同极性的大孔吸附树脂及6种组合精制黄连解毒汤复方水提液,HPLC法测定复方水提液在不同大孔树脂及其组合上指标成分含量的动态变化,计算得到吸附-解吸率并绘出吸附-解吸动力学曲线,从化学成分转移角度,比较各组精制效果。同时进行细胞药效学筛选,比较各组精制产物对缺氧缺糖PC12细胞的保护作用,综合分析获得黄连解毒汤抗脑缺血有效部位。2)采用电凝法制备脑缺血模型,和假手术大鼠分别灌胃相同剂量药物,给药后分别在规定的时间取血,置于肝素钠抗凝的离心管中备用。含药血浆经处理后,建立血浆中小檗碱、巴马汀、黄芩苷和栀子苷的含量测定方法;同时进行抗自由基氧化药效动力学研究,测定不同时间点血浆SOD、MDA值。考察不同机体状态对小檗碱、巴马汀、黄芩苷和栀子苷药代动力学及抗氧化药效动力学的影响规律。研究结果:组合树脂6(HPD100-AB-8 2:1)精制黄连解毒汤能够较好地实现等效分离,发挥原复方抗脑缺血药效作用;有效部位中小檗碱、巴马汀、黄芩苷和栀子苷四种主要成分在脑缺血病理模型与正常机体内表现出一定的差异,主要表现为:模型组吸收效果较假手术组要好,且吸收更快,达峰浓度更高。SOD、MDA值同样出现差异,表明脑缺血造成大鼠体内发生缺氧损伤。大鼠灌胃给药后,SOD活力出现回升,MDA水平显著降低,表明黄连解毒汤有效部位能够改善由于缺血损伤导致的缺氧抵抗。研究结论:通过大孔树脂组合精制结合药效筛选方式获取了黄连解毒汤抗脑缺血有效部位,建立了 HPLC同时测定黄连解毒汤中四种指标性成分血药浓度的方法;得出了黄连解毒汤有效部位中主要指标成分在脑缺血模型和正常大鼠体内的药代动力学和药效动力学差异,为药代动力学研究作了新的探索,也为黄连解毒汤的合理用药和新药创制提供了依据;同时首次尝试采用树脂组合的手段实现多成分的分离,为中药复方的等效分离提供了可借鉴的方法。