复方黄芪养心合剂对大鼠再灌注心律失常及心室重构的作用和机理的研究

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目的第一部分:观察复方黄芪养心合剂(compound astragalus mixture nourishing heart, CAMNH)对SD大鼠冠状动脉结扎术后再灌注心律失常(reperfusion arrhythmias, RA)及心肌缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)分布的改变和表达的影响,并探讨RA与心肌Cx43的关系。第二部分:观察CAMNH对SD大鼠冠状动脉结扎术后心脏重构(cardiac remodeling, VR)超声心动图(ultrasonic cardiogram, UCG)的影响,心肌及血管周围胶原纤维化的影响,以及心肌Cx43分布的改变和表达的影响,并探讨胶原纤维化与心肌Cx43的关系。方法第一部分:应用CAMNH高剂量(CAMNHh)、中剂量(CAMNHm)、低剂量(CAMNH1)分别按28g·14ml-1·1kg-1·d-1、14g·7ml-1·1kg-1·d-1、7g·3.5ml·1kg-1·d-1剂量灌胃,琥珀酸美托洛尔缓释片(metoprolol succinate sustained-release tablets, MSSRT)(9.5mg·7ml-1·1kg-1·d-1)灌胃2周后,对SD大鼠行冠状动脉左前降支结扎30min后再灌注60min造成RA模型,记录心电图,进行室性心律失常(ventricular arrhythmias, VA)评分;免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)观察心肌Cx43的分布,运用Image Pro Plus6.0图像分析软件计算Cx43的平均光密度(average optical density of Cx43, Cx43-AOD,%)。对VA评分与Cx43-AOD(%)进行相关性分析。第二部分:对SD大鼠行冠状动脉左前降支结扎术后观察10天。存活大鼠随机分组后应用CAMNHh、CAMNHm、CAMNH1及MSSRT灌胃8周。术后给药第4周和第8周分别进行UCG测定,并进行前后对比及变化幅度对比。计算全心室重与体重比(Vt/Wt,%)。使用改良Masson染色法观察大鼠心室重构,用Image Pro Plus6.0图像分析系统,计算心肌组织胶原容积分数(collagen volume fraction, CVF,%)和血管周围胶原面积(perivascular collagenvolume area, PVCA,%)。IHC法观察心肌Cx43分布的改变,免疫印迹法(western blot, WB)检测心肌Cx43的表达,应用Quantity One1-D Analysis Software分析计算心肌Cx43比值(the ratio of Cx43, Cx43-T,%)。对CVF(%)、 PCVA(%)与心肌Cx43-T(%)进行相关性分析。结果第一部分:VA评分(分)CAMNH1组与MSSRT组显著低于I/R组及CAMNHh组(P<0.01)。梗死区和缺血区多位于心肌内膜下,非缺血区多位于心肌中层。心肌内膜下缺血区域Cx43-AOD(%)MSSRT组、CAMNHm组与CAMNH1组均高于I/R组(P<0.05)。VA评分与缺血区心肌Cx43-AOD(%)呈负相关(P<0.05)。第二部分:术后第6周UCG:LVEF1(%)及FS1(%) CAMNHm组、CAMNH1组较SO组明显降低(P<0.01);较MSSRT组降低(P<0.05);与VR组相近(P>0.05)。术后第10周UCG:LVDs1(mm)MSSRT组、CAMNHm组较VR组明显减小(P<0.01);CAMNH1组较VR组减小(P<0.05)。LVEF2(%)与FS2(%):CAMNHm组、CAMNH1组、MSSRT组明显高于VR组(P<0.01)。前后对比:LVDs(mm):VR组增大(P<0.05); LVEF(%)及FS(%)在VR组及MSSRT组进一步降低(P<0.01)。变化幅度对比:ΔLVDs(mm):MSSRT组、CAMNHh组、CAMNHm组、CAMNH1组增大幅度均较VR明显减小(P<0.01);ΔLVEF(%)和△FS(%):CAMNHh组、CAMNHm组、CAMNH1组及MSSRT组降低幅度较VR组明显减小(P<0.01)。Vt/Wt (%): MSSRT组小于VR组(P<0.05); CAMNHm组、CAMNH1组明显小于VR组(P<0.01)。CVF(%)与PVCA (%):CAMNHm组、CAMNH1组及MSSRT组与VR组相比明显降低(P<0.01);CAMNHh组与VR组相比降低(P<0.05)。心肌Cx43非梗死区Cx43表达与SO组比较有所减少。心肌Cx43-T(%)CAMNH1组、MSSRT组较VR组明显增加(P <0.01)。CAMNHh组、CAMNHm组较VR组增加(P<0.05)。CVF(%)、PCVA(%)与心肌Cx43-T(%)呈显著负相关(P<0.01)。结论第一部分:CAMNH1有抗RA作用,与MSSRT相近。CAMNHm、CAMNH1可促进再灌注心肌缺血区Cx43的表达,其作用与MSSRT相近。CAMNH1抗心律失常作用可能与其促进再灌注心肌缺血区Cx43的表达有关。第二部分:CAMNHm、CAMNH1能够持续改善VR LVDs(mm)的增大以及LVEF(%)、 FS(%)的降低,减轻Vt/Wt(%),其作用与MSSRT相当。CAMNHh、CAMNHm、CAMNH1能降低VR CVF(%)、PVCA(%),改善VR非梗死区心肌Cx43的表达减少,与MSSRT相当,其作用无剂量依赖性。CAMNH抗VR作用可能与其改善非梗死区心肌Cx43的表达减少有关。
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