目的:研究化学药物与基因干扰抑制人白血病多药耐药细胞株K562/AO2细胞葡萄糖神经酰胺合酶(glucosylceramide synthase ,GCS)基因的表达与多药耐药(multidrug resistance,MDR)的关系,探讨MDR的发生机制并寻求治疗耐药白血病的新策略。方法:(1)用环孢素A(CsA)和苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)联合作用人白血病多药耐药细胞株K562/AO2,Alamar BlueTM多功能细胞染色法测定阿霉素(ADR)对细胞的半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测GCS基因、mdr1基因的mRNA表达。(2)设计多对针对GCS基因的siRNA,实时定量PCR(qPCR)筛选基因表达抑制效果最好的一对;脂质体法转染siRNA进入K562/AO2细胞,qPCR及流式细胞仪(FCM)检测GCS基因mRNA和蛋白的表达,依公式计算GCS基因表达抑制率;RT-PCR法检测mdr1基因表达,以排除siRNA分子对其的非特异性抑制; Alamar BlueTM多功能细胞染色法测定ADR对细胞的生长抑制率,计算IC50。结果:(1)CsA联合PPMP可明显降低K562/AO2细胞GCS基因mRNA的表达(P<0.01),并提高细胞对ADR的药物敏感性;低浓度CsA联合PPMP不仅可以抑制GCS基因的表达逆转其多药耐药,还降低了细胞毒性。(2)siRNA分子成功干扰了K562/AO2细胞GCS基因的表达且对MDR1基因表达无影响,GCS mRNA表达的抑制率为73.38%;干扰前后K562/AO2细胞蛋白表达率差异为18.41倍;干扰GCS基因的表达后,K562/AO2细胞对ADR的药物敏感性恢复,耐药逆转倍数为5.6倍。结论:药物作用与RNA干扰抑制GCS基因的表达可以显著提高K562/AO2细胞对化疗药ADR的敏感性,GCS基因高表达与白血病多药耐药的发生密切相关;GCS基因在白血病多药耐药的发生中起着重要作用,抑制GCS基因的表达、拮抗其蛋白功能有望成为治疗耐药白血病的新方法。