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涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC），是头颈部常见的恶性肿瘤之一，具有嗜神经侵袭和远处转移两大生物学特点，术后易复发。众多的研究表明，Notch信号通路与肿瘤的发生发展有关。本课题组前期实验发现，Notch信号通路中的受体基因Notch1、4在涎腺腺样囊性癌高转移细胞株SACC-M中表达明显高于低转移细胞株SACC-2。本研究以Notch1、4为研究对象，研究其与涎腺腺样囊性癌细胞增殖、侵袭及迁移的关系。研究分为两个部分，分述如下：一、用siRNA技术研究Notch1、4基因对涎腺腺样囊性癌细胞功能的影响目的：验证Notch1、4受体基因与涎腺腺样囊性癌细胞增殖、侵袭以及迁移的关系。方法：根据Notch1、4的序列设计合成siRNA，转染SACC-M细胞，应用Real-time PCR技术，研究其Notch1、4的表达变化；用CCK8法研究Notch1、4表达被抑制后SACC-M细胞增殖能力的变化；采用侵袭小室法研究Notch1、4表达被抑制后SACC-M细胞侵袭迁移能力的改变。结果：Real-time PCR检测结果显示Notch1、4的表达下降；CCK8法研究发现转染72h后，转染siRNA的SACC-M细胞增殖能力弱于阴性对照组；侵袭小室法研究结果表明，Notch1、4表达下降后，SACC-M细胞的侵袭、迁移能力也随之下降。结论：Notch1、4对SACC-M的增殖、侵袭以及迁移能力有影响。二、Notch1、4基因shRNA重组腺病毒载体的构建目的：构建重组腺病毒载体。方法：根据文献选取的Notch1、4的siRNA序列，设计合成带有HindⅢ、XhoⅠ酶切位点的shRNA片段；穿梭载体pRNAT-H1.1/Adeno行HindⅢ、XhoⅠ双酶切后与shRNA片段连接，转化E.coliDH5α，鉴定正确的质粒命名为pRNAT-H1.1-Notch1-1、pRNAT-H1.1-Notch1-2、pRNAT-H1.1-Notch4-1和pRNAT-H1.1-Notch4-2；用Pme I酶切线性化重组穿梭质粒，转化Bj5183进行同源重组，Pac I酶切鉴定获重组腺病毒载体pAd-Notch1-1、pAd-Notch1-2、pAd-Notch4-1、pAd-Notch4-2；将pAd-Notch1-1、pAd-Notch1-2、pAd-Notch4-1、pAd-Notch4-2PacI酶切线性化后按脂质体法转染AD-293进行包装；通过荧光显微镜观察细胞GFP的表达，待贴壁细胞变圆脱落后，收集培养液上清及细胞，获取第一代病毒液，并扩增至第五代。病毒感染SACC-M后，用Real-time PCR验证干扰效果。结果：Real-time PCR检测针对Notch1基因的shRNA重组腺病毒载体干扰效果达到50%以上；针对Notch4基因的shRNA重组腺病毒载体干扰效果不佳。结论：成功构建了针对Notch1基因shRNA重组腺病毒载体，干扰效果较理想；针对Notch4基因的shRNA腺病毒载体构建成功，但干扰效果尚不理想。