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胶体金是具有一定尺寸大小,并且可以保持稳定胶体状态的贵金属纳米粒子。由于颜色醒目,所以胶体金作为示踪物广泛应用于免疫学检测。同时,胶体金具有较高的摩尔消光系数和可调的可见光吸收峰,因此也可以作为淬灭剂应用于检测。黄曲霉毒素M1(Aflatoxin,AFM1)是黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的次级代谢产物。在潮湿的环境下,AFB1会污染谷物,奶牛吃了AFB1污染的谷物后会产生含AFM1的牛奶,因此AFM1也被称为“牛奶毒素”。大肠杆菌O157:H7对于人类健康而言是一种严重的威胁,因此,有必要设计一种快速且灵敏的方法来检测它们。本论文利用胶体金的显色作用和淬灭作用实现对AFM1和大肠杆菌O157:H7的检测。真菌毒素和致病菌可能存在于同一食品样本中,因此有必要在样本中将其同时检出。本文第二章以胶体金为显色标记物将竞争法和双抗夹心法集成在同一个试纸条上,从而实现了对小分子物质(AFM1)和大分子物质(大肠杆菌O157:H7)的同时检测。结果表明,AFM1检测时,线性范围为100 pg/mL-1000 pg/mL,在牛奶中的检测灵敏度为50 pg/mL。大肠杆菌O157:H7检测时,线性范围为1.65×10~4 CFU/mL-3.3×10~6 CFU/mL,在牛奶中的检测灵敏度为1.58×10~3 CFU/mL。整个检测过程耗时30 min。检测AFM1时回收率为78.0%-111.6%,变异系数为3.9%-8.5%。检测大肠杆菌O157:H7时,回收率为70.1%-89.6%,变异系数为4.9%-13.0%。在成功检测两种危害物的基础上,进一步探讨了检测线的位置对竞争法和双抗夹心法的影响。结果表明,当竞争法和双抗夹心法同时存在于一个试纸条时,双抗夹心法的检测线应该靠近样本垫来提高灵敏度,竞争法的检测线应该远离样本垫来提高抑制率从而实现高灵敏检测。第三章设计了一条含有模板区和锚定区的DNA单链。模板区作为一种载体来合成有荧光的银纳米簇;锚定区含有Poly A,它可以吸附到金纳米粒子的表面,从而拉近金纳米粒子与银纳米簇的距离,使得银纳米簇的荧光被金纳米粒子淬灭。基于上述淬灭过程,本章设计了一种有趣的双抗夹心ELISA,通过银纳米簇的荧光强度与大肠杆菌O157:H7浓度之间的关系来定量检测大肠杆菌O157:H7。该方法检测大肠杆菌O157:H7的灵敏度为1.905×10~3 CFU/mL,线性范围为1.3×10~4-2.6×10~6 CFU/mL,与传统ELISA方法相比,灵敏度有30倍的提高。此外,在PBS中,传统ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7的回收率为91.2%-104.9%,变异系数为7.5%-10.1%;本方法检测的回收率为90.1%-96.2%,变异系数为8.1%-13.0%。在低脂奶中检测大肠杆菌O157:H7的回收率为89.8%-100.6%,变异系数为7.3%-8.5%;在全脂奶中检测大肠杆菌O157:H7的回收率为87.6%-95.0%,变异系数为8.8%-10.2%。