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本实验旨在研究持续性和非持续投喂枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌及其复合菌对军曹鱼幼鱼生长性能、免疫酶、消化酶、肠道菌群结构及TLR9基因表达量的影响,为益生菌在水产养殖业中的应用提供指导。选取平均体重为22.0±0.15g的健康军曹鱼幼鱼840尾,随机分成7个处理(组号:T0、T1、T2、T3、T4、T5、T6),每处理3重复,重复40尾鱼。T0组投喂基础饲料,T1、T2、T3组前30d分别投喂含枯草芽孢杆菌1×107cfu/g、嗜酸乳杆菌1×107cfu/g、含枯草芽孢杆菌+嗜酸乳杆菌(1:1)2×107cfu/g的饲料,后20d投喂基础饲料;T4、T5和T6组分别投喂T1、T2、T3组饲料50d,分别在0d、10d、20d、30d、40d、50d检测各实验组血清LZM、SOD、ACP和AKP活性;在0d、30d、50d时获取军曹鱼的肠道,通过高通量测序技术和PCR-DGGE技术分析其肠道菌群结构与多样性,并对优势菌群进行物种注释。在实验结束时称重,计算各处理组的生长性能,并测定肝脏和肠道淀粉酶、蛋白酶活性,测定军曹鱼TLR9基因在肝脏、肾脏、脾脏和肠道中的表达量。结果表明:T0、T1和T2组的WGR无显著差异(P>0.05),且低于T3-T6组,T6组有最大值,显著高于其它各组。SGR的趋势与WGR类似。T2-T6组的FCR显著优于对照组(P<0.05),T4和T6组有最佳值,显著低于其它各组(P<0.05)。7个实验处理组的血清LZM在整个实验期里呈先上升后降低趋于平稳,在10d时有最大值,显著高于其它时间点(P<0.05);添加益生菌处理组的血清LZM显著高于对照组(P<0.05);在第10d和30d时,益生菌添加组之间LZM无显著差异(P>0.05);在第20d时,T3和T6组显著高于其它组(P<0.05);在第40d时,T2和T3组显著高于其它各组(P<0.05);在第50d时,T1-T6各组有显著差异(P<0.05),且以T6的值最高。血清T-SOD同样呈现先上升后降低趋于平稳的趋势,在20d时达到最大值;在第10d时,T1-T6组显著高于对照组(P<0.05),但各组间无显著差异(P>0.05);而在第20d时,益生菌添加组结果与第10d类似,但T6显著高于T1和T5组(P<0.05);在第30d时,除T2和T5组显著低于对照组(P<0.05)外,其它组与对照组无显著差异;在第40d时,t2和t3组显著低于对照组,其它组与对照组无显著差异(p>0.05);在第50d时,t4-t6组显著高于t0-t3组,且以t6组t-sod最佳。血清akp呈先上升后下降的趋势,且在第40d时除t1和t3组略有降低,其它组均达到最大值;在第10d时,t1-t6组显著低于对照组(p<0.05),但彼此间无显著差异;在第20d时,各组无显著差异(p>0.05),而在30d、50d时,t1-t6组显著低于对照组(p<0.05);在第40d时,除t2和t4组与对照组无显著差异外,其它组显著低于对照组(p<0.05)。血清acp同样呈现先上升后下降的趋势,且在第20d时达到最大值;在第10d时,除了t3和t6组,其它组显著高于对照组(p<0.05),且t1和t4显著高于其它组;在第20d时,t1和t4组与对照组无显著差异,其它组显著高于对照组(p<0.05);在第30d时,t1和t4与对照组无显著差异,其它组显著低于对照组(p<0.05);在第40d时,t1-t6组显著低于对照组,且t6显著高于t3和t4组(p<0.05);在第50d时,t1和t2组显著高于t0组(p<0.05),而t6与对照组无显著差异(p>0.05),其它组显著低于对照组。t1-t6组肝脏淀粉酶活性显著高于对照组(p<0.05),且以t6组为最高,相反t1-t6中肠淀粉酶活性显著低于对照组,且以t5组为最低;t5和t6组前肠淀粉酶活性显著高于对照组及其它各组(p<0.05);t4组后肠淀粉酶活性与t3和t6无显著差异(p>0.05),但显著高于其它各组。t1-t6组肝脏蛋白酶显著高于对照组(p<0.05),且以t5和t6组最佳;t4-t6组前肠、中肠和后肠蛋白酶显著高于其它各组(p<0.05),且以t6组有最大值。军曹鱼幼鱼30dt6和50dt6组前肠样品shannon指数显著高于对照组及其它组(p<0.05),表明这两组样品的菌群多样性高于其它组;50dt0组样品与0dy(0d时肠道样品)、30dt0、50dt6组样品的beta多样性指数具有显著性差异(p<0.05),同样50dt1组样品与30dt5、30dt6组的beta多样性也存在显著差异。0d与50dt0-t4组前肠优势菌群为发光杆菌属,所占菌群比例分别为91.24%、76.77%、75.89%、94.92%、99.56%,而30dt0和30dt5组优势菌群为不动杆菌属,所占比例分别为73.73%和95.6%,50dt5-t6组优势菌群为沙雷氏菌属,所占肠道菌群比例为69.85%和62.73%,30dt4和30dt6组优势菌群分别为弧菌属和葡萄球菌属,所占肠道菌群比例为89.41%和53.55%。军曹鱼幼鱼0d和30d各组后肠样品条带数无显著差异,平均条带数为6.38,t0和t4-t6之间存在共性条带band18、band19,且band19为优势菌群占比例平均为74.13%,t0与t4、t5、t6组肠道菌群相似性分别为64%、67%、40%;而在50d时,除T3组条带数为10.66外,其它组平均条带数为15,无显著差异,T0-T3组之间存在共性条带10条,其中Band6、28、35和45的条带为该时期肠道中的主要优势菌群,占比例分别为36.1%、15.75%、15.27%和11.74%,T0与T1-T3组肠道菌群相似性分别为67%、66%、52%;T4-T6组共性条带10条,其中Band5、32、37和40为优势菌群条带,平均占比例为42.16%、14.97%、10.36%和10.68%,T4与T5-T6之间肠道菌群相似性为58%、46%和64%。除T2组与对照组无显著差异(P>0.05)外,其它各组肝脏TLR9基因表达量均显著提高,尤其是T4-T6组显著高于T0-T3组(P<0.05),但T4-T6三组之间无显著差异(P>0.05);T3-T6组肾脏TLR9基因表达量显著高于对照组(P<0.05),且T6组显著高于T3-T5组(P<0.05),T1和T2组显著低于对照组(P>0.05);TLR9基因在脾脏中的表达量趋势与肝脏类似(P<0.05);T1-T6组TLR9基因在肠道中的表达量显著高于对照组(P<0.05),T4-T6组间无显著差异(P>0.05),T1-T3组情况与之类似。在本实验条件下,饲料中添加枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌或二者1:1的复合物能够促进军曹鱼幼鱼的生长,提高免疫酶和消化酶活性,有效改善肠道菌群结构,上调TLR9基因的表达水平。持续投喂方式优于非持续投喂,且二者复合物效果最佳。