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目的:(1)评价曲霉菌半乳甘露聚糖抗原(GM)、1,3-β-D葡聚糖抗原(BG)及Real-Time PCR检测方法对恶性血液病患者侵袭性曲霉菌感染(IA)的诊断价值以及这些方法在监测抗真菌治疗效果中的作用。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法、比色测定法以及Real-Time PCR三种方法检测197例白血病和行造血干细胞移植患者的613份血清标本的GM、BG浓度以及曲霉菌DNA拷贝数,其中GM试验阳性定义为连续两次不同时点检测A值>0.5或单次>0.8,BG试验阳性定义为>80pg/ml ,Real-Time PCR以标本两孔Ct均值≤30定义为阳性。并根据我国制定的血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染(IFI)的诊断标准与治疗原则为标准,将研究对象分为:确诊、临床诊断、拟诊及非真菌感染四个类别,分别研究和对比三种诊断试验的评价指标。结果:共收集197例白血病和进行造血干细胞移植患者的613份血清标本。其中包括确诊IFI3例其中确诊IA 1例,临床诊断IFI66例其中确诊IA 52例,拟诊IFI52例,排除IFI76例。(1)按照试验中界定的界值,GM试验的敏感度为81.1%,特异度为88.2%,,阳性预测值为90.2%,阴性预测值为86.5%,在全部分组中BG试验的的敏感度为89.9%,特异度为85.5%,阳性预测值为84.9%,阴性预测值为90.2%,两试验的假阳性率分别为12.8%,14.5%,差异无统计学意义(P>0.05),两者假阳性患者的分布差异有统计学意义(P<0.05)。联合两种检测方法则可明显改善试验的特异度(98%)及阳性预测值(98%),而对试验的特异度及阴性预测值无影响。(2)Real-Time PCR以标本两孔Ct均值≤30定义为阳性,其敏感性为90.6%,特异性为80.3%,阳性预测值为76.2%,阴性预测值为92.4%,诊断符合率84.5%。(3)三种检测方法联合的诊断评价,以确诊及临床诊断IA患者为真阳性组,以排除IFI患者为阴性组。显示三者联合的敏感度为100%,特异度为78.5%,阳性预测值为75.1%,阴性预测值为100%,三者联合,诊断的敏感度明显提高,特异度仅轻度下降。(4)本研究中的前瞻性研究发现,三种检测方法阳性结果出现均比临床痰培养及典型影像学表现要早(表3.6),Real-time PCR结果提示阳性较GM,BG抗原检测要提前,但t检验P=0.824,P=0.641,差异均无统计学意义。(5)38例完成针对曲霉菌感染抢先治疗的患者,按疗效分为有效组及无效组,分别于静脉抗真菌药物使用前-3、0、3、7、11、15d ,6个时点检测GM,BG,Ct均值,结果如下:a.治疗有效组GM值呈下降趋势并降至正常,治疗无效组GM值反而上升。对无效组与有效组在不同检测时点GM值总体分布位置进行Wilcoxon秩和检验。有效组与无效组在治疗前GM值分布无差异(P=0.864),在治疗7 d后其检测值分布差异有统计学意义(P<0.05)。b. BG抗原在治疗过程中的变化趋势与GM在治疗过程中的变化趋势类似。c.Real-time PCR:在临床及微生物学依据出现之前,Ct值的均值有下降趋势,进行抗曲霉抢先治疗后,治疗有效组其Ct值迅速上升,治疗无效组其Ct值起始亦有上升趋势,后Ct值又有下降趋势,治疗前有效组与无效组Ct值差异无统计学意义(P>0.05),治疗后在各检测时点其Ct值差异亦无统计学意义(P>0.05)。因此,动态检测GM,BG抗原对抗真菌疗效的评价有着一定的意义,而动态监测Ct值对评价疗效无显著性意义。结论:血清BG,GM抗原检测以及实时荧光定量PCR可以为早期诊断IA提供有力证据,联合BG,GM抗原两种检测方法有利于判断假阳性试验结果,动态检测GM、BG抗原水平,有利于判断疗效及预后;Real-Time PCR,以标本两孔Ct均值≤30定义为阳性,可以获得较高的敏感度及特异度,动态监测Ct值对评价疗效无显著性意义。