从黄连下脚料中“酶解-超声”联合提取黄连素研究

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[背景]黄连属毛茛科,品种很多,野生黄连对生长环境条件要求比较严苛,但黄连素为其最主要的生物学活性成分,有消炎抗菌、抑肿瘤、降血糖等功效,临床应用非常普遍。黄连的非药用部位所占生物量比例也很可观,目前的生产和研究对象大多集中在黄连的根块上,且提取率一般,在提取的过程当中,对黄连的叶柄、茎叶、根须等下脚料也产生了浪费。而且黄连的生长对其所处自然环境要求较高,且生长周期很长。而采挖过程中不注意对黄连的保护,使其数量日益减少,甚至部分已经成为高危植物。虽然近些年人工种植栽培黄连已经初见成效,但野生黄连的市场需求仍居高不下,因为野生资源数量的不断减少,产区的范围缩小,产量的下降已经成为制约着全国中药行业可持续发展的瓶颈。与此同时,由于黄连的培育条件较为苛刻,因此其培育成本也会随之上升。但在黄连素提取的过程中,往往采用黄连的根块,这就会造成黄连其他部位的资源浪费。所以,如果将黄连的须根、茎叶也能充分的利用起来,资源就可以更好的被利用,同时,也解决了生产成本过高的问题。[目的]1、传统的黄连提取黄连素会对其叶柄、茎叶、根须造成浪费,本研究目的为达到对黄连的下角料充分利用,从下角料中高效提取盐酸小檗碱。2、通过试验条件的优化,创建一种快速、高效、易于工业生产的盐酸小檗碱提取方法。[方法]1、本研究利用柱色谱-紫外可见分光光度法测定黄连下脚料中药效成分生物碱的含量;2、基于总生物碱含量的研究,利用紫外可见分光光度计,探究黄连下脚料中主要药效成分黄连素的含量;3、根据超声辅助工艺因素的提取研究,得到单因素结果,进一步分析。然后设计正交试验,对不同提取因素和超声条件对提取率的影响进行初步探究。最后,得到超声辅助提取工艺的最佳试验方案;4、探究超声辅助提取、酶解辅助提取、酶解-超声联合提取盐酸小檗碱产品的工艺流程,建立不同工艺条件与盐酸小檗碱提取率的试验模型;5、运用高效液相色谱法,探究不同提取工艺与盐酸小檗碱产品纯度的关系,验证不同提取方法对盐酸小檗碱产品质量的效果,为黄连下脚料提取黄连素工艺方法的质量评价提供研究基础。[结果]1、利用紫外可见分光光度法,对黄连下脚料中所含有的有效生物碱成分进行测定。采用碱性氧化铝柱层,可以较好的消除杂质对测定的干扰,进而测得黄连下脚料中总生物碱的含量。2、在紫外可见分光光度计辅助下,利用超声辅助提取工艺进行单因素试验分析,各因素的最大影响水平为:70%的乙醇浓度,料液比为1:25(g:mL),180W超声功率,50℃超声温度下,超声30min。同时,为了进一步考察优选工艺的可靠性和稳定性,结合正交试验设计,试验表明此工艺稳定性好,可靠性高,可以为盐酸小檗碱的提取提供一定的数据支持。3、通过超声辅助、酶解辅助提取工艺的研究,考察了酶解-超声联合提取盐酸小檗碱的最佳工艺条件。4、利用HPLC高效液相色谱法,测定黄连下脚料中盐酸小檗碱的含量。通过该方法,有效的验证了此次试验的可靠性、仪器操作的稳定性,进一步对超声辅助提取、酶解辅助提取和酶解-超声联合提取盐酸小檗碱产品的纯度同时进行了分析评价。同时,作为提取工艺的质量控制,可以更准确的对特定成分进行分析。[结论]为了将黄连下脚料中主要药效成分黄连素最大程度分离出来,并建立有效的黄连下脚料提取盐酸小檗碱(盐酸黄连素)的工艺流程。本研究初步探究了超声辅助提取、酶解辅助提取、酶解-超声联合提取盐酸小檗碱产品的工艺方法,分析了不同提取方法的工艺条件对盐酸小檗碱产品的提取率和质量纯度的影响,为将来更好的利用黄连下脚料,充分获得黄连素药用成分提供了前期研究基础。
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目的:本研究旨在采用天然药物成分α-常春藤皂苷(α-Hederin)探究其对人食管鳞癌(ESCC)细胞的增殖、迁移及凋亡的影响,并从ROS-p38 MAPK通路探究其潜在作用机制,为α-常春藤皂苷应用于临床食管鳞癌治疗提供理论依据。方法:本实验以食管鳞癌细胞KYSE-30作为实验对象进行以下步骤:(1)采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度(0、20、40、60、80μM)α-常春藤皂苷作
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2015年5月7日、7月13日和9月10日,以太湖流域构建的平缓坡度人工林河岸缓冲带为研究对象,比较了不同宽度(5 m、15 m、30 m和40 m)、不同植物类型(杨树林、中山杉林和杨树中山杉混交林)、不同植物密度(400株/hm2、1 000株/hm2和1 600株/hm2)的河岸缓冲带对不同深度径流水中总氮(TN)、铵态氮(NH4+—N)和硝态氮(NO3-—N)的去除率。研究结果表明,随着缓
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