【摘 要】
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目的:探讨生骨再造丸通过FKBP52/GRα/miRNA-708信号通路对激素性股骨头坏死（SANFH）骨髓间充质干细胞（BMSCs）成脂分化的影响。方法:（1）血清制备:将20只新西兰大白兔随机分为空白组和生骨再造丸组各10只,空白组给予生理盐水灌胃,生骨再造丸组给予生骨再造丸灌胃,1周后取两组兔血清。（2）构建FKBP52过表达慢病毒载体。（3）复苏前期冻存的空白兔BMSCs,分为空白+空白血
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目的:探讨生骨再造丸通过FKBP52/GRα/miRNA-708信号通路对激素性股骨头坏死（SANFH）骨髓间充质干细胞（BMSCs）成脂分化的影响。方法:（1）血清制备:将20只新西兰大白兔随机分为空白组和生骨再造丸组各10只,空白组给予生理盐水灌胃,生骨再造丸组给予生骨再造丸灌胃,1周后取两组兔血清。（2）构建FKBP52过表达慢病毒载体。（3）复苏前期冻存的空白兔BMSCs,分为空白+空白血清组（K组）、模型+空白血清组（M组）、模型+含药血清组（MY组）、模型+过表达空载+空白血清组（MG0组）、模型+过表达+空白血清组（MG组）、模型+过表达空载+含药血清（MG0Y组）和模型+过表达+含药血清（MGY组）共7组并给予相应处理。（4）所有组别采用CCK8法检测BMSCs存活率,q RT-PCR检测各组BMSCs中微型核糖核酸-708（mi RNA-708-3p、mi RNA-708-5p）、FKBP52的基因表达,Western Blot验证FKBP52蛋白过表达,ELISA染色检测糖皮质激素受体α（GRα）的表达,油红“O”染色检测胞质内脂滴变化。对所得数据进行统计学分析。结果:（1）CCK8法检测细胞存活率,MG组细胞存活率明显低于M组（P＜0.05）,M组和MG0组、MY组和MG0Y组细胞存活率无明显差异（P＞0.05）。MGY组细胞存活率明显高于MG组（P＜0.05）,MG0Y组细胞存活率显著高于MG0组（P＜0.05）。（2）BMSCs中FKBP52基因表达:采用qRT-PCR检测各组BMSCs中FKBP52的基因表达,M组FKBP52基因表达明显低于K组（P＜0.05）;MG组FKBP52基因表达明显高于M组;MY组FKBP52基因表达明显高于M组（P＜0.05）;MG0Y组FKBP52基因表达明显高于MG0组（P＜0.05）;MGY组FKBP52基因表达明显高于MG组（P＜0.01）。（3）BMSCs中FKBP52蛋白表达:Western Blot检测M组、MG0组和MG组BMSCs中FKBP52蛋白表达,结果显示,M组和MG0组FKBP52蛋白表达无明显差异（P＞0.05）,MG组FKBP52蛋白表达明显高于M组和MG0组（P＜0.05）。（4）BMSCs中GRα的表达:M组GRα表达明显高于K组（P＜0.05）;MY组GRα表达明显低于M组（P＜0.05）;MG组GRα表达明显高于M组（P＜0.05）;MG0Y组GRα表达明显低于MG0组（P＜0.05）,MGY组GRα表达明显低于MG组（P＜0.05）。（5）BMSCS中miRNA-708基因表达:与K组比较,M组miRNA-708-3p表达明显上升（P＜0.05）;与M组比较,MY组miRNA-708表达明显降低（P＜0.05）,与M组比较,MG组mi RNA-708表达明显降低（P＜0.05）;与MG0组比较,MG0Y组mi RNA-708表达明显降低（P＜0.01）;与MG组比较,MGY组mi RNA-708表达明显降低（P＜0.05）。（6）BMSCs的成脂分化情况:油红“O”染色观察各组BMSCs脂滴变化,K组BMSCs胞浆中可见少量红色脂滴,M组BMSCs胞浆中可见大量红色脂滴,经FKBP52过表达慢病毒感染后胞浆内红色脂滴明显减少。生骨再造丸含药血清干预后,MY组、MGY组MG0Y组胞浆中出现散在分布的橘红色脂肪滴,数量明显较少,介于空白组和模型组之间。结论:（1）过表达的FKBP52可显著抑制GRα、miRNA-708表达。（2）GC能够诱导FKBP52表达降低,并进一步诱导GRα表达增高,GRα转录激活上调miRNA-708表达,这可能是BMSCs成脂分化的机制之一。（3）生骨再造丸通过靶向调控BMSCs中FKBP52的表达增高,抑制GRα、miRNA-708表达,从而抑制BMSCs的成脂分化是治疗SANFH的主要机制之一。
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