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采用离子交换柱DEAE-SepharoseFF和凝胶层析柱Superdex75 Prep Grade和SephacrylS-200 High Resolution，可从杏鲍菇（Pleurotus eryngii）干样中分离得到多个蛋白组分，经枯斑寄主检测，发现多个蛋白组分都有抗烟草花叶病毒（Tobacco mosaic Virus,TMV）的活性，对TMV的抑制率均在70％以上，高者可达99％。其中xb68Ab已得到了纯化，分子量约为23.7 kDa，在心叶烟和苋色藜上它对TMV侵染的抑制率分别达到99.43％和98.9％。 采用阴离子交换柱DEAE-sepharoseFF和凝胶层析柱Sephacryl S-200 High Resolution从新鲜食用菌榆黄蘑（Plearotus citrinopileatus）中进行了抗病毒蛋白的纯化，结果获得了一个纯化蛋白YP46-46，经SDS-PAGE可确定其分子量为27.4 kDa。以半叶法在枯斑寄主心叶烟上检测该蛋白对TMV的抑制率，发现有较好的抗TMV活性，其抑制TMV的中浓度C50为0.240μg／mL。同时以HepG2.2.2.15细胞株为模型，对所获得的蛋白进行体外抗乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）效果的评价。结果表明该蛋白对HBsAg的50％抑制时的浓度为0.08μg／mL，但对HBeAg效果不大。 通过DEAE-SepharoseFF离子交换层析、Superdex75凝胶层析和高效液相色谱，从金针菇（Flammulina velutipes）中可获得抗烟草花叶病毒蛋白Zb，该蛋白在不同季节的金针菇上其含量是不同的。采用半叶法在心叶烟上检测抗烟草花叶病毒活性，发现该蛋白的抑制中浓度为4.4μg／mL。通过负染和胶体金染色电镜观察，发现Zb蛋白可导致TMV粒体的崩解，推测是对外壳蛋白在起作用，而非对核酸起作用。同时检测该蛋白体外抗HBV的活性时，发现也是对HBsAg作用明显，50％抑制时的浓度为0.117μg／mL，而对HBeAg无明显作用。 检测Zb蛋白的活性时还表明它有较好的凝集素活性。当Zb蛋白的初始浓度为0.2961mg／mL时，对兔血红细胞以及人的O、A、B三种类型的血红细胞的血凝滴度均为2-12。在检测Zb蛋白的抑制肿瘤的试验中，对胃癌细胞株MGC80-3的抑制率在50％时的Zb蛋白浓度约为0.75μg／mL，且发现Zb蛋白主要是导致MGC80-3细胞的裂解。以载玻片上孢子萌发法检测了Zb蛋白的抑制植物病原真菌和细菌的作用，没发现对灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、辣椒盘长孢（Colletotrichum piperatum）三种真菌及青枯假单胞菌（Pseudomonas solanaceavum）、黄单胞杆菌（Xanthomonas oryzae（Vyedaet Ishiyama）Dowson）二种细菌有抑制作用。 对Zb蛋白的生化特性进行了研究，研究表明该蛋白是分子量为30kDa的单 祸建农林大学博士学位论文y 亚基蛋白，没有结合糖，其等电点为4．7。测定了它的N－端20个氨基酸序列为： PQVKTSWEDLANLGWPIQQV。由此可确定Zb蛋白是已报道的TDP蛋白和flamfnutoxin 蛋白。通过质谱分析，获得了该蛋白的肽质量指纹图谱。通过SDS干AGE的进一 步纯化，切取Zb蛋白条带，皮下多点注射家兔，可获得效价较高，特异性强的 Zb蛋白抗血清。 采用盯－PCR从金针菇中获得了Zb的CDNA序列，根据它的开放阅读框可知 该蛋白是由272个氨基酸残基组成，其中只有一个半耽氨酸残基，不含分于间和 分子内h硫键。以Zb基因上的特异性5；物进行PCR扩增，检测了阿魏蘑、鸡腿 菇、猴头菇、金针菇、小平菇、雪杨、香菇、鲍鱼菇、紫抱平菇、草菇和榆黄蘑 这 11种食用菌所提总 DNA的扩增情况，结果和金针菇一样，除草菇以外都可出现 860hP左右的特异性条带。但以另一对引物进行PCR扩增，在草菇、滑菇和灵芝 中又可扩增到与金针菇中大小相同的830hP的片断。以地高辛标记的探针进行 Southern blot检测，对金针菇、草菇、滑菇、鲍鱼菇、香菇、灵芝、雪杨、猴 头和阿魏蘑的PCR产物可起阳性反应。采用间接ELISA的方法，以Zb蛋白的抗 血清，检测了茶树菇、高温平菇、鲍鱼菇、雪杨和香菇这5种食用菌菌盖和菌柄 中存在Zb的同源性蛋白情况，结果表明其它食用菌中存在与Zb抗血清起反应的 蛋白。最终经DNA测序表明在猴头菇（一个位点的差异）和鸡腿菇中存在基本相 同的序列。 将Zb基因导人烟草中，检测表明Zb基因己经转入烟草植株中。日前发现有 一株转基因烟有异常现象，其它均生长正常。经供毒试验表明，发现一株生长 矮小的植株有一定抗性。