实验目的：应用自体大隐静脉进行冠状动脉旁路移植术，术后远期一 个重要的并发症是由于新生内膜和随之发生的粥样硬化而发生再狭窄，大量 研究认为血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖和迁移是血管再狭窄的细胞学基础， 而VSMC增殖与凋亡的失衡导致新生内膜的增生与重构。对于移植静脉远期 再狭窄，目前尚无有效的防治方法。本研究观察转染野生型P53基因及低能 量激光照射对移植静脉VSMC增殖与凋亡的影响，探索转基因疗法和激光疗 法防治移植静脉远期再狭窄的可行性及作用机理，为进一步的实验研究和临 床应用提供新的思路。 实验方法：在293细胞中扩增的携带有人野生型P53基因或报告基因─ 绿色荧光蛋白（GFP）─的腺病毒，经氯化铯密度梯度和连续密度超速离心方 法纯化，获得高纯度、高度浓缩的腺病毒。建立兔颈外静脉颈总动脉移植模 型，按照以下分组进行实验：1、P53基因转染组：血管移植前，利用血 管内注射的方法，在移植静脉血管平滑肌细胞内转染野生型P53基因；2、GFP 基因转染组：血管移植前，利用血管内注射的方法，在移植静脉血管平滑肌 细胞内转染GFP基因；3、低能量激光照射组：血管移植后，应用IECu－1O铜 蒸气激光器，输出波长510．6nm，输出功率500mW/cm~2，于血管外照射静 脉 1000秒，照射能量达 500J／cm~2；4、P53基因转染并低能量激光照射组：联 合血管内注射进行转染野生型P53基因及低能量激光血管外照射两种方法处 理移植静脉。术后4周，免疫组织化学方法检测外源P53基因的表达及增殖 细胞核抗原（PCNA），应用DNA片段末端标记法（TUNEL）标记凋亡细胞。 HE、Masson及Victoria blue染色后，应用计算机图像分析系统检测移植静脉 内膜、中膜增生情况。 2 中国人民解放军军医进修学院 解放军总医院 博士论文 实验结果：l、应用腺病毒载体转染野生型P53基因，可以在移植静脉血 管平滑肌细胞中超表达P53蛋白。术后4周，与对照实验组相比，VSMC细 胞增殖率降低 61％，细胞凋亡率增加 25％，移植静脉内膜和中膜厚度分别减 少60％、33％，内膜厚度／中膜厚度比值（l／M）减少37％。而同样方法转染超 表达GFP基因，术后4周，与对照实验组相比，VSMC细胞增殖率、细胞 凋亡率无显著差异，移植静脉内膜和中膜厚度无明显变化。2、应用低能量激 光进行血管外照射的移植静脉，术后4周，与对照组相比，VSMC增殖率降 低 41．5％，细胞凋亡率增加 40．9％，显著抑制了 VSMC细胞增殖，促进细胞 凋亡，术后 4周，移植静脉内膜和中膜厚度分别减少 58，5％、18％，I／M比值 减少47．2％。3、转染P53基因同时应用低能量激光照射移植静脉，术后斗周， 移植静脉VSMC增殖率较对照组降低61．7％，细胞凋亡率增高47％，移植静 脉内膜和中膜厚度分别减少69厂％、44．4％，I／M比值减少44．5％。 l 结论：转染野生型P53基因和／或低能量激光血管外照射可以抑制移植静 脉血管平滑肌细胞增殖，促进移植静脉血管平滑肌细胞凋亡，使移植静脉内 膜和中膜的增生减轻，具有防治移植静脉远期再狭窄的作用。