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背景:糖尿病（diabetic mellitus,DM）是由于多种病因引起的代谢紊乱性疾病,特点是慢性高血糖水平、胰岛素分泌不足或作用障碍[1]。近年来随着我国人民生活质量的提升,DM发病率越来越高,据2017年国际糖尿病联盟（international diabetes federation,IDF）数据统计,我国DM患病数量居全球首位,其中约有25%～40%可发展为糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）[2]。对于DN的发病机制,大量文献研究报道DN是多种复杂因素综合作用的结果,其中炎性细胞因子水平的升高在DN演变过程中起重要作用。一项关于2型糖尿病研究发现,与健康对照组和正常蛋白尿的DN患者相比,微量白蛋白尿患者的单核细胞趋化因子-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）值更高,提示MCP-1参与了DN炎性反应的过程,导致DN的发生及进展[3]。MCP-1的主要作用是激活血循环中单核细胞转化为巨噬细胞并迁移到炎症部位发挥调节作用。因此,研究MCP-1水平的变化规律对DN的早期诊断和治疗有一定的指导意义。自二十世纪八十年代外泌体被发现以来,有关于外泌体的研究越来越多,外泌体被定义为由有质膜的、融合的多囊泡体在管腔内释放而成。对外泌体内容物分析发现其中含有多种蛋白、核酸和脂质等成分,可由体内大多数细胞分泌并释放入微环境中,并作为一种媒介参与细胞间通讯、蛋白质和RNA传递[4,5]。本研究提取并检测尿液外泌体中MCP-1基因的含量变化规律,为寻找诊断早期DN的标志物。目的:本研究拟证明健康人和DN患者尿液经差速超速离心法可提取出外泌体,同时评估细胞因子MCP-1的基因、蛋白表达水平在健康人和早期DN患者尿液外泌体中的差异,以期明确MCP-1在早期DN中的变化规律,为DN早期诊断探索出新的方法。方法:根据筛选标准,分别纳入30例早期DN患者和30例健康正常人,分为实验组和对照组。收集他们的性别、年龄、吸烟史等一般资料,蛋白尿、血尿、高血压病史、收缩压、舒张压、尿微量白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、空腹血糖、甘油三酯、胆固醇、血肌酐、血尿素氮、血尿酸、血红蛋白等临床资料。以上所有临床资料整理后,根据是否服从正态分布,采用t检验或Mann-Whitney U检验进行组间差异分析。收集每个健康人和患者新鲜晨尿400ml,经差速超速离心法提取每个样本尿液中外泌体,应用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）和透射电子显微镜观察（Transmission electron microscope,TEM）对外泌体进行鉴定,采用试剂盒法提取外泌体中mRNA,通过实时荧光定量PCR法检测外泌体中MCP-1的mRNA表达量和提取各组尿外泌体中的蛋白,经蛋白免疫印迹实验检测MCP-1蛋白水平,并应用统计学方法t检验对组间差异进行分析,p<0.05视为有统计学意义。结果:1.本研究共纳入60例候选者,其中健康者30例作为正常对照组,包括男性11例,女性19例,平均年龄为55.00±13.19,糖尿病肾病患者30例作为糖尿病肾病组,包括男性15例,女性15例,平均年龄56.37±11.89,两组在性别、年龄、吸烟史、高血压病史比较差异无统计学意义,糖尿病肾病组在尿微量白蛋白、空腹血糖、血尿素氮、蛋白尿水平明显高于正常对照组（p<0.05）。2.采取差速超速离心法提取正常对照组和糖尿病肾病组的尿液样本,所得外泌体成分在电镜下观察呈现为类圆形的杯状小体,在蛋白免疫印迹实验中,外泌体表面标记性蛋白CD9及TSG101表达阳性。3.与正常对照组比较,糖尿病肾病组患者尿液外泌体中MCP-1的mRNA水平、蛋白含量明显升高（p<0.05）。结论:1.利用差速超速离心法,可从健康人和早期DN患者尿液中成功分离出外泌体。2.糖尿病肾病组患者尿外泌体中MCP-1的基因表达水平明显高于正常对照组,提示尿液外泌体中MCP-1的基因表达水平有望成为临床诊断早期DN的指标。