动物组织中喹噁啉类药物残留检测方法研究

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喹嗯啉类药物作为饲料添加剂在我国畜牧业上应用广泛,其在动物体内众多代谢物对药效和毒性均会产生影响。研究建立该类药物及代谢物残留的快速筛选和确证分析方法能够为其安全评估和药理毒理学研究提供参考技术。对喹乙醇进行结构改造合成半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白偶联后免疫新西兰大白兔,获得喹嗯啉类多克隆抗体,建立了猪肝中8种喹嗯啉类药物及代谢物(喹乙醇、卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮、1—脱氧喹赛多、脱二氧喹烯酮、脱二氧乙酰甲喹和喹嗯啉—2—羧酸)残留的间接酶联免疫吸附检测方法。包被原采用2-丙烯酸-1,4-脱二氧喹噁啉。该方法的IC50为0.10-2.50μg·L-1。样品经0.2mol·L-1-乙腈(3+5,v/v)提取,浓缩后检测。在1-100μg·kg-1的添加浓度范围内,各化合物的平均回收率为80.14-96.90%,批内变异系数为5.67-13.82%,批间变异系数为6.22-14.19%。方法的检测限为0.03-0.79μg·kg-1。采用活化酯法合成3—甲基喹噁啉—2—羧酸(MQCA)—牛血清白蛋白偶联物后免疫巴比小鼠,采用体内腹水诱生法获得MQCA的单克隆抗体,建立了猪肝组织中MQCA残留的间接ELISA方法。该方法的ICso为5.72μg·L-1。样品经2mol·L-1盐酸酸解后乙酸乙酯-正己烷-异丙醇(8+1+1)提取,ELISA检测。在1-100μg·kg-1的添加浓度范围内,MQCA的平均回收率为85.44-100.02%,批内变异系数为6.64-10.57%,批间变异系数为7.29-10.88%。该方法的检测限值为0.27μg·kg-1。建立了猪肝组织中喹烯酮及代谢物1—脱氧喹烯酮、4—脱氧喹烯酮、脱二氧喹烯酮和MQCA残留的超高效液相色谱—飞行时间质谱确证分析方法。先采用乙酸乙酯提取,收集提取液。样品残渣中加入盐酸溶液继续提取。用乙酸乙酯萃取盐酸提取液中的MQCA。合并各次的乙酸乙酯提取液于鸡心瓶中。加入磷酸盐缓冲液后旋转蒸发除去乙酸乙酯,MAX混合阴离子小柱净化后上机检测。该方法的检测限为1.4-4.8μg·kg-1,定量限为4.6-15.9μg·kg-1。对猪肝样品进行20-100μg·kg-1的药物空白添加回收实验,各化合物的平均回收率为77.99-86.54%。批内变异系数为2.00-6.62%,批间变异系数为2.13-5.14%。建立了猪肉和虾组织中喹赛多及代谢物喹噁啉—2—羧酸、1-脱氧喹赛多和脱二氧喹赛多残留量的超高效液相色谱—串联质谱确证分析方法。样品经乙腈-0.5mol·L-1盐酸(9+1)提取,MAX混合阴离子交换小柱净化后上机检测。对猪肉和虾进行2-50μg·kg-1的药物空白添加回收试验,各化合物的平均回收率为80.0-94.7%,批内变异系数为1.5-14.6%,批间变异系数为3.1-13.5%。方法的检测限为0.38-1.16μg·kg-1,定量限为2μg·kg-1。建立了猪肝组织中13种喹噁啉类药物及代谢物(卡巴氧、喹噁啉—2—羧酸、喹乙醇、4-脱氧喹赛多、喹赛多、脱二氧喹赛多、4—脱氧喹烯酮、1—脱氧乙酰甲喹、脱二氧喹烯酮、脱二氧乙酰甲喹、喹烯酮、MQCA、乙酰甲喹)残留的超高效液相色谱—串联质谱确证分析方法。用3mol·L-1盐酸对样品进行酸解后,加入0.1%甲酸—乙腈溶液(4+6)提取,HL8小柱净化后检测。10-500μg·kg-1药物空白添加回收试验表明,各化合物的回收率为79.8-93.7%,批内变异系数为3.7-14.0%,批间变异系数为5.3-15.6%。方法的检测限为0.33-2.51μg·kg-1,定量限为1.10-8.37μg·kg-1。
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