绵羊体内桑椹胚和囊胚转录组特征分析及早期胚胎性别鉴定

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本研究基于组学技术与高通量测序技术,从单个胚胎水平分析不同时期绵羊早期胚胎基因转录表达情况,研究桑椹期和早期囊胚期胚胎发育特征,进而研究胚胎发育快速增殖、胚胎细胞分化相关可能性因素。为进一步研究早期胚胎生命活动进行提供理论基础与数据支持。1.通过分析绵羊桑椹胚VS囊胚基因表达特征,共筛选出15689个差异表达基因,显著上调484个,显著下调的326个。通过GO功能富集分析,富集到BP和CC区域的基因明显多于MF区域,在MF分类中上调和下调差异基因主要富集于细胞间连接和调控催化活性,BP和CC分类中主要富集于细胞和细胞器等发育进程及结构组成。由于桑椹胚和囊胚仍具有部分干细胞特性,表现出快速增殖的发育特点。通过KEGG通路富集分析结果显示,基因表达调控以胚胎细胞增殖、代谢及基因组激活后表达调控为主。胚胎细胞与癌细胞具有相似特征,主要富集于代谢和快速增殖相关通路。桑椹胚到囊胚期桑椹时期胚胎已经表现出功能分化特征,全能性降低,是胚胎内外胚层分化的重要阶段。2.绵羊桑椹胚和早期囊胚发育中,CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、MAD2L1、MAPK12、BMP2、BMP4、GATA3、TRA2B参与调节胚胎增殖和分化过程,并发挥重要作用。进一步在桑椹胚和囊胚中表达定量结果显示CDK1、CDK4呈上调趋势且差异显著。CDK2、CDK6、MAPK12表达差异不显著。MAD2L1表达量较低,且差异并不显著。BMP2、BMP4基因相对表达量结果显示,BMP4表达量显著上调,BMP2表达差异不显著,与胚胎发育进程一致。GATA3在桑椹胚与囊胚中均有表达,相对表达量差异不显著并稳定表达。TRA2B相对表达定量结果表明其差异不显著,其可能参与调节胚胎增殖分化发育过程,还需进一步研究。3.为了后续进一步研究不同性别胚胎的基因转录表达特征研究,通过DNA层面对绵羊胚胎性别进行鉴定并优化鉴定效果。运用胚胎切割技术超微量DNA扩增SRY基因,鉴定绵羊胚胎性别方法体系灵敏度可达到约10 pg(3~4个细胞),且该体系方法可稳定鉴定胚胎性别,效果良好。综上所述,早期胚胎发育在严格且精确的多信号通路协同调控下,确保胚胎正常发育。胚胎细胞的增殖分化是胚胎发育为个体的关键因素之一,具有不同功能作用的基因转录促使分裂分化过程进行。普遍认为胚胎细胞的一系列变化过程中胚胎细胞第一次谱系分化在囊胚阶段,然而实际可能更早。DNA层面鉴定绵羊早期胚胎性别方法的优化效果较好,但采用先鉴定后进行转录组测序的办法仍存在较大困难。
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