【摘 要】
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本实验主要研究戊肝抗原蛋白基因在大肠杆菌中优化表达的方法，以期获得具有免疫原性的戊肝抗原蛋白，为戊肝基因工程疫苗的研究奠定基础。 首先采用氯化钙法将克隆有戊肝抗原
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本实验主要研究戊肝抗原蛋白基因在大肠杆菌中优化表达的方法，以期获得具有免疫原性的戊肝抗原蛋白，为戊肝基因工程疫苗的研究奠定基础。 首先采用氯化钙法将克隆有戊肝抗原蛋白基因的质粒载体pTO-T7-E转化导入大肠杆菌BL21(DE3)中。对经卡那霉素抗性筛选出的单克隆菌落扩增培养后，提取质粒，通过酶切和PCR法进行鉴定，确定转化菌。然后分别在25℃、30℃、37℃条件下对筛选出的转化菌培养，以1mmol／L IPTG诱导表达，超声裂解菌体，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测目的蛋白，蛋白印迹分析目的蛋白的免疫原性。 实验结果表明：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示：在37℃条件下经IPTG诱导的菌体中可见分子量约21KDa的重组蛋白，与理论值相符。表达产物主要以包涵体形式存在于胞内。蛋白印迹分析表明：该目的蛋白具有免疫原性。
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