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背景与目的: NK/T细胞淋巴瘤(natural killer/T-cell lymphoma,NKTCL)是非霍奇金淋巴瘤的一类亚型,发病率在 T细胞淋巴瘤中占首位,以“高侵袭、易复发、预后差”为特点,具有独特的流行病学分布特点,在我国发病率明显高于欧美国家,好发于成年男性,平均中位年龄50岁。NKTCL具体发病机制研究尚未完全阐明,制约了临床诊疗水平的提高,目前国内外众多研究认为与EB病毒感染、遗传因素等有关。 NKp30是NK细胞表面十分重要的活化性受体,人的NKp30分子相对特异性地表达于所有NK细胞:静息NK细胞、活化的NK细胞、体外由CD34+细胞诱导形成的未成熟NK细胞以及NK细胞系NK92和NKL细胞。近几年的研究发现,NKp30分子具有广泛特异识别的特点,即一个受体可以识别多个不同类型配体。通过与不同类型的配体的结合,发挥多种多样的生物学功能,因此,NKp30分子的重要性受到众多肿瘤学研究者的广泛关注。但目前尚无有关 NKp30在 NKTCL中的研究,NKp30对NK/T细胞淋巴瘤有何生物学特性影响及其分子机制有待进一步深入研究。 因此本研究选取 NKTCL细胞系 SNK-6作为研究对象,从以下三个方面进行探讨NKp30对NKTCL细胞系SNK-6生物学功能的影响及其临床意义:1.NKp30在NKTCL临床样本的表达和意义;2.NKp30对NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6恶性生物学功能的影响;3.NKp30对NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6体内生物学特性的影响。 第一部分:NKp30在临床样本的表达和意义 目的: 了解NKp30在临床样本的表达和意义。 方法: 收集NK/T细胞淋巴瘤的标本和鼻腔炎症对照组织,使用免疫组化方法检测NKp30在其中的表达,应用相应的统计软件,分析NKp30表达与NKTCL临床及病理因素的关系。 结果: 1.对收集的标本免疫组化染色,膜表面出现棕黄色颗粒标记为阳性细胞。对照组有1.8%的标本NKp30阳性细胞的比例≤10%,89%的标本数NKp30阳性细胞比例>20%。而实验组84%的标本数NKp30阳性细胞的比例≤10%,只有16%标本NKp30阳性细胞>10%;差异有统计学意义。 2.免疫组化图显示对照组NKp30的表达量明显较NKTCL组高。 结论: NK/T细胞淋巴瘤标本中NKp30表达量较炎症组织明显下降。 第二部分:NKp30对NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6体外恶性生物学功能的影响 目的: 了解NKp30对NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6恶性生物学功能的影响 方法: 构建NKp30过表达的SNK-6细胞系,命名为SNK-6-NKp30。 1.CCK8法检测SNK-6、SNK-6-CON与SNK-6-NKp30细胞系的细胞增殖; 2.流式细胞技术检测三组细胞系的细胞凋亡和周期; 3.检测三组细胞系对于感染含GFP标记的慢病毒肝癌细胞的杀伤作用; 4. Elisa检测三组细胞系与病毒感染细胞共培养后TNFα及INFγ的表达情况; 5.采用Western blott方法检测三组细胞系JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达情况。 结果: 1.随着时间的延长,SNK-6、SNK-6-CON与SNK-6-NKp30细胞系的细胞增殖率升高,但不同组之间比较没有统计学差异; 2.24h后三组细胞系细胞周期没有差异,而NKp30使SNK-6细胞系的凋亡率增加; 3. SNK-6-NKp30细胞系明显增加了对GTP阳性细胞的杀伤作用; 4. SNK-6-NKp30细胞系TNFα及INFγ的表达明显较SNK-6、SNK-6-CON增加; 5.SNK-6-NKp30细胞系JAK-stat信号通路相关蛋白pJAK2,pSTAT3,pSTAT5的蛋白表达水平明显较SNK-6、SNK-6-CON细胞系降低,说明NKp30分子的过表达抑制JAK-STAT信号通路激活。 结论: 1.过表达NKp30不影响SNK-6的细胞增殖周期。 2.过表达NKp30使SNK-6细胞系的凋亡率增加。 3.过表达NKp30可以导致NK细胞的免疫活性增加; 4.过表达NKp30可以增加NKTCL细胞因子的表达。 5.过表达NKp30抑制了JAK-STAT信号通路的异常活化,可能与NKTCL恶性生物学特性有关。 第三部分:NKp30对NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6体内生物学特性的影响 目的: 了解NKp30对NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6体内生物学特性的影响。 方法: 将浓缩的细胞悬液(高表达组、阴性对照组、空白组)分别接种于裸鼠前肢部皮下。观察小鼠皮下肿瘤的形成率、大小及生长情况。 结果: 1.SNK-6、SNK-6-CON这两种组别中,肿瘤体积随着观察时间的延长,体积明显增加,且生长速度较快,在 SNK-6 NKp30这种过表达 NKp30的细胞系中,肿瘤生长速度明显较慢,肿瘤体积明显较小,差异有统计学差异; 2.各组肿瘤的免疫组化图:SNK-6组:NKp30表达为阴性;SNK-6-CON组:NKp30表达为阴性;SNK-6-NKp30组:NKp30在组织细胞膜表达为强阳性。 结论: NKTCL细胞中过表达NKP30可以有效抑制小鼠模型肿瘤生长。