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目的建立并验证超高压液相色谱-串联质谱法检测干血滤纸片上丙戊酸血药浓度的方法。方法样品处理：30μL含丙戊酸的全血滴在滤纸上,室温下晾干至少3个小时,待干透后从滤纸上打孔取下6mm直径的血斑,放入2mL普通离心管中,加入含有一定浓度内标的超纯水溶液150μL,超声水浴10min,加入350μL乙腈,震荡5min后离心10min,取上清液稀释60倍进样。色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18column (1.7μm,2.1×100mm),流动相为乙腈-5mM醋酸铵(PH=7.8)(80：20%),等度洗脱,流速0.5ml/min,柱温50℃。质谱条件：在API5500型质谱仪上完成检测,负离子检出模式,以质荷比m/z143.0/143.0和120.9/67.8分别检测丙戊酸和苯甲酸。方法学验证：包括线性、批内／批间精密度与准确度、特异性、提取回收率和介质效应、稳定性、滤纸片的色谱效应、全血体积和HCT值对检测结果的影响。方法应用和比较：用所建立的丙戊酸干血滤纸片UPLC-MS/MS法(DBS-UPLC-MS/MS)测定来自50名患者的50个临床样本,并将检测结果与丙戊酸血浆UPLC-MS/MS法(Plasma-UPLC-MS/MS法)和丙戊酸荧光偏振免疫法(FPIA法)的检测结果进行比较,使用统计学软件进行分析并作图。结果在上述的色谱-质谱条件下,丙戊酸和苯甲酸的保留时间在0.57和0.48min,基线平稳,峰形可,无杂峰干扰。丙戊酸标准曲线线性范围为5-160μg/mL, r=0.9978。高、中、低浓度质控及定量下限的精密度和准确度均符合要求。丙戊酸的提取回收率为82.0-88.4%,无明显的介质效应。干血滤纸片样品稳定性良好,可在室温下稳定存放至少7d,在4℃下稳定存放至少10d,在50℃下存放1d,在-20℃下可存放至少30d。未检测到滤纸片的色谱效应。使用不同体积(30μL、50μL)的全血滴在滤纸上或不同HCT值(25%、35%、45%、55%)的全血对检测结果无明显影响。比较DBS-UPLC-MS/MS法、Plasma-UPLC-MS/MS法和FPIA法,Passing-Bablok回归分析提示DBS-UPLC-MS/MS法和Plasma-UPLC-MS/MS法一致性较好,FPIA法与DBS-UPLC-MS/MS法、Plasma-UPLC-MS/MS法一致性较差；Bland-Altman差异图提示DBS-UPLC-MS/MS法与Plasma-UPLC-MS/MS法检测的丙戊酸浓度低于FPIA法测得值,而DBS-UPLC-MS/MS法与Plasma-UPLC-MS/MS法的差异不大。结论本研究建立的干血滤纸片上丙戊酸血药浓度的超高压液相色谱-串联质谱分析法,具有灵敏、专属性强的特点,滤纸片的色谱效应对检测结果无明显影响,在一定范围内,血斑负载血量和红细胞压积对检测结果无明显影响,该法检测结果与临床常用的FPIA法存在一定差异,将该法推广应用于丙戊酸的临床检测仍有待进一步研究。