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目的：建立石胆草药材中有效成分苯乙醇苷类和黄酮碳苷类成分的质量控制方法,并优化石胆草药材中有效成分苯乙醇苷类和黄酮碳苷类成分的提取、纯化工艺,为石胆草药材的进一步开发应用提供理论基础和实验依据。
方法：(一)分别以1′-O-β-D- (3,4-二羟基苯乙基)- 4′-O-咖啡酰基-β-D-芹糖(1→3′)-β-D-葡萄糖-(1→6′) -葡萄糖苷(PGs),5,4′-二羟基-6,7-二甲氧基-8-C-[β-D-木糖-(1→2)]-β-D-葡萄糖黄酮碳苷(FC-GsⅢ)为对照品,采用紫外分光光度法(UV)测定石胆草中总苯乙醇苷和总黄酮碳苷的含量,并采用RP-HPLC法测定石胆草中1′-O-β-D- ( 3 , 4-二羟基苯乙基)- 4′-O-咖啡酰基-β-D-芹糖(1→3′)-β-D-葡萄糖-(1→6′) -葡萄糖苷(PGs)、5,7,4′-三羟基-6-甲氧基-8-C-[β-D-木糖-(1→2)]-β-D-葡萄糖黄酮碳苷(FC-GsⅠ)、5,3′,4′-三 羟 基 -7,8-二 甲 氧 基 -6-C-[β-D-木 糖 -(1→2)]-β-D-葡 萄 糖 黄 酮 碳 苷(FC-GsⅡ)、5,4′-二羟基-6,7-二甲氧基-8-C-[β-D-木糖-(1→2)]-β-D-葡萄糖黄酮碳苷(FC-GsⅢ)等多个指标性成分的含量,从而建立石胆草药材的质量控制方法。(二)以总苯乙醇苷和总黄酮碳苷的提取量为考察指标,运用平行试验考察溶剂浓度、提取温度、提取时间、固液比、提取次数等单个因素对提取效率的影响,正交试验考察主要因素间交互作用对提取效率的影响,最终优选出最佳的提取工艺。(三)以总苯乙醇苷和总黄酮碳苷的总收率为考察指标,对X-5、AB-8、D4006、NKA-Ⅱ、HPD-100、HPD-450、HPD-600七种不同性质的大孔吸附树脂的吸附-解吸性能进行考察,确定最优的纯化用树脂类型,再分别对最优纯化树脂的各个纯化参数进行考察,最终选出最佳的纯化工艺条件。
结果：(一)石胆草药材中总苯乙醇苷的含量约为 0.85%,在 2.67~26.7 mg·L-1(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为 99.04%,RSD 为0.79%(n=6)；总黄酮碳苷的含量约为 1.93%,在2.69~26.9 mg·L-1(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为 99.77%, RSD 为 1.04%(n=6)。PGs、FC-GsⅠ、F C-G sⅡ、FC-GsⅢ这四种成分的含量分别为 0.56%、0.51%、0.17%、1.05%,且线性关系亦良好,r均大于0.999,线性范围分别为0.4~3.2μg (PGs)、0.32~2.56μg (FC-GsⅠ)、0.4~3.2μg (FC-GsⅡ)、0.46~3.52μg (FC-GsⅢ),平均加样回收率>98.9%,相对标准偏差RSD<2.08%(n=6)。(二)以总苯乙醇苷提取量为考察指标时,所得最佳提取工艺条件为 A1~2B3C1~3D3,以总黄酮碳苷提取量为考察指标时,所得最佳提取工艺条件为 A2B3C1~3D2~3。结合实际工业生产,最终确 定石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的最佳提取工艺为 A2B3C1~3D3,即药材加 12 倍量 50%乙醇,80℃回流提取 2 次,每次提取时间 1.5~3.5h。(三)以大孔吸附树脂对总苯乙醇苷和总黄酮碳苷的吸附-解吸率为考察指标,确定 HPD-100 为最佳纯化用树脂类型,且最佳的纯化工艺条件为：石胆草提取物吸附浓度为 0.08g·mL-1,与HPD-100树脂比为0.22g：1mL,树脂径高比为1：6,除杂剂为5倍量柱体积的水,除杂流速为 3 BV·h-1,洗脱剂为 6 倍量柱体积的 30%乙醇,洗脱流速为 2 BV·h-1。
结论：(一)采用 UV 结合 HPLC 建立的石胆草中苯乙醇苷类和黄酮碳苷类成分的含量测定方法,测定石胆草药材中总苯乙醇苷和总黄酮碳苷以及 PGs、FC-GsⅠ、F C-G sⅡ、FC-GsⅢ的含量,分别为 0.85%、1.93%、0.56%、0.51%、0.17%、1.05%,并且该方法操作简便、结果准确,可用于石胆草药材的质量控制；(二)以总苯乙醇苷和总黄酮碳苷的提取量为考察指标,采用平行实验结合正交试验得到最佳提取工艺：药材加 12 倍量 50%乙醇,80℃回流提取 2 次,每次提取时间 1.5~3.5h；(三)以大孔吸附树脂对总苯乙醇苷和总黄酮碳苷的吸附-解吸率为考察指标,得到的最佳纯化工艺：石胆草提取物吸附浓度为 0.08g·mL-1 ,与HPD-100树脂比为0.22g：1mL,树脂径高比为1：6,除杂剂为5倍量柱体积的水,除杂流速为3 BV·h-1,洗脱剂为6倍量柱体积的30%乙醇,洗脱流速为2 BV·h-1；(四)通过通过工艺验证试验可知,最终确立的石胆草中苯乙醇苷类和黄酮碳苷类成分的提取纯化工艺是稳定的,可操作的。