长白猪不同个体ECR1-like分子量差异及其密度多态性研究

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目的:为探讨猪红细胞免疫黏附受体CR1-like(ECR1-like)的多态性特点,本实验从个体水平上分析ECR1-like的分子量、膜表达数量及免疫黏附水平等方面是否具有个体差异,以期探讨天然状态下影响ECR1-like发挥免疫黏附活性的生物学因素,为后期深入研究疾病发生发展过程中猪ECR1-like发挥免疫功能的分子机理提供理论数据。方法:随机选取健康长白猪为实验动物,前腔静脉无菌采血,制备红细胞悬液。以免疫沉淀技术和western blot检测不同个体的ECR1-like的分子量大小,采用SPSS Statistics V21.0统计软件进行统计学分析,使用单样本Kolmogorov-Smirnov(K-S)分析实验数据是否属于正态分布,以散点分布及t检验分析比较ECR1-like分子量大小不同分布区间的荧光平均值与总体荧光平均值;流式细胞术检测ECR1-like表达水平,使用单因素方差分析,检测红细胞是否表达CR1-like,使用单样本K-S分析实验数据是否属于正态分布,以散点分布及t检验分析比较红细胞荧光值不同分布区间的荧光平均值与总体荧光平均值;以荧光大肠杆菌为报告菌株,流式细胞术检测不同个体红细胞黏附荧光强度,使用单因素方差分析,检测红细胞是否黏附大肠杆菌,使用单样本K-S分析实验数据是否属于正态分布,以散点分布及t检验比较红细胞荧光值不同分布区间的荧光平均值与总体荧光平均值;应用Pearson相关性分析ECR1-like膜表达数量及免疫黏附水平二者之间的关联程度。结果:经免疫沉淀及western bolt结果发现猪ECR1-like的蛋白条带大小分别为:135 kDa,120kDa,85 kDa。根据标准曲线计算出不同样本的ECR1-like的分子量大小,经统计学软件分析,ECR1-like的分子量实际大小依次为85.280±0.935 kDa(样本数量占总体的 9.091%)、123.939±2.753 kDa(14.545%)、136.696±2.281kDa(76.364%);流式细胞术检测获得不同样本的红细胞荧光强度(代表ECR1-like表达水平)及相应的直方图,经统计学软件分析,红细胞荧光强度(ECR1-like的表达水平)在个体水平上分为低、中、高 3 种类型,其平均荧光值依次为 21.479±0.865(14.583%),27.984±2.218(81.034%)和36.690±0.058(6.897%);此外,流式细胞术检测获得不同样本的红细胞荧光强度(代表红细胞免疫黏附水平)及相应的直方图,经统计学软件分析,红细胞荧光强度(红细胞免疫黏附水平)在个体水平上分为低、中、高3种类型,其平均荧光值依次为33.897±3.294(34.483%),68.076±12.145(46.552%)和 129.232±8.143(18.966%);经Pearson相关性分析发现长白猪红细胞免疫黏附水平与ECR1-like表达水平显著相关(r =0.835**,P<0.01),回归分析获得二者符合典型的 S 曲线(lny=7.817-102.91 1x,r2 = 0.729**,P<0.01)。结论:天然状态下,不同个体的长白猪其CR1-like膜分布密度、蛋白分子量具有数量多态性,且CR1-Iike数量多态性是引起猪红细胞免疫黏附水平个体差异性的分子基础。
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