热带海岛植物草海桐与单叶蔓荆的繁育技术研究

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草海桐与单叶蔓荆是热带海岛植物的代表种,也是热带海岛植被恢复的重要工具种,在海岛植物群落结构以及生态环境恢复方面具有重要的作用。本文分别以草海桐的种子、叶片、根以及单叶蔓荆的茎段为外植体,建立了提高草海桐种子萌发的方法、草海桐叶片与根的体细胞胚及其不定芽发生途径的植物再生体系和单叶蔓荆茎段扁平化诱导与不定芽发生途径的植物再生体系。为满足草海桐与单叶蔓荆的种苗需求提供基础。具体结果如下:1、最优的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)检测草海桐种子生活力的组合是0.4%TTC,黑暗条件下孵育3 h。自然风干15 d后的草海桐种子生活力达到90%以上。在室温条件或者4℃条件下贮藏15-90 d,草海桐的种子依然显示较高的生活力,当贮藏时间延长到180 d时,种子生活力分别显著下降。草海桐果实的外果皮含有丰富的营养物质,在自然条件下容易腐烂发霉,从而使得其种子萌发率很低。当去除其外果皮后,种子的萌发起始时间比未去除外果皮的萌发起始时间提前了8 d(前者的种子开始萌发时间所需28 d,后者所需36 d),萌发率也大大的提高。将去除外果皮的草海桐果实于不同溶液中浸泡不同时间处理,在播种40 d后统计草海桐种子萌发率发现:用海水浸泡24 h的去除外果皮的种子具有最高的萌发率,而去离子水浸泡和GA3溶液浸泡的种子萌发率次之。然而,当播种时间延长到60 d后,该差异不显著。将生长60 d后的实生苗移栽到混合有黄泥与泥炭土(体积比为3:1)的土壤中,移栽30 d后实生苗的移栽成活率为80.2%。2、草海桐的叶片和根均可发生体细胞途径或不定芽器官发生途径的植株再生。不同的植物生长调节剂对不同的外植体(叶片或根)具有不同的体细胞胚或者不定芽诱导效率。叶片在单独添加3.0 mg/L 6-酰基腺嘌呤(BA)的Murashige&Skoog(MS)培养基上培养的体细胞胚和不定芽的综合诱导效果最好,诱导率与平均每块叶上的体细胞胚和不定芽总数量分别为98.3%与48.1。草海桐的根在单独添加1.5-2.5 mg/L噻苯隆(TDZ)的培养基上培养可获得最好的体细胞胚与不定芽诱导效果,其诱导率最高可达98.8%,体细胞胚与不定芽总数为52.7个。通过组织切片观察发现,草海桐叶片上的体细胞胚与不定芽均可来源于表皮细胞或者叶肉细胞,而根的体细胞胚与不定芽主要来源于紧挨表皮的薄壁细胞。在0.75 mg/L BA与0.25 mg/L NAA或者1.0 mg/L BA与0.1 mg/L NAA组合的培养基上培养可使体细胞胚与不定芽均获得较好的增殖与伸长效果,增殖系数与平均株高最高分别为2.8和3.73 cm。芽体在添加2.5-3.5 mg/L吲哚丁酸(IBA)或者1.0 mg/L IBA与1.0 mg/L NAA的1/2 MS培养基中可获得最好的生根效果,其最高生根率与生根系数分别为98.8%与23.0。将生根良好的草海桐组培苗移栽到100%河沙的基质中45 d后的成活率为82.7%。3、单叶蔓荆的不定芽发生以及茎段扁平化形态的建成可以被细胞分裂素所调节,0.1-0.5 mg/L激动素(KIN)、玉米素(ZEA)以及0.1 mg/L的BA均可在正常茎段中诱导不定芽的发生;然而高浓度的KIN、ZEA和BA不仅可以在正常茎段中诱导不定芽,而且还可以诱导正常的茎段形成扁平化的形态,该扁平化的茎段上面也可产生大量的不定芽。将扁平化茎段上的不定芽接种于含有1.5-2.5 mg/L NAA的MS培养基中培养30 d后可伸长3.0 cm,从而恢复成为正常的芽体。通过解剖学观察发现,扁平化的茎段其髓部细胞横切生长,较正常茎段的椭圆形的细胞宽0.02-0.04 mm,也正是这个原因使得其茎段呈扁平化的形态。通过流式细胞仪的倍性分析发现,扁平化的茎段的细胞倍性与正常茎段的细胞倍性无差异。将该伸长后的不定芽从母体切离后,接种于添加3.0 mg/L NAA和3.0 mg/L IBA的1/2 MS培养基中,培养30 d后,70.5%的芽体可诱导生根,平均生根系数为86.3。将生根良好的组培苗移栽到混合有黄泥与泥炭土(体积比为3:1)的土壤中,移栽30 d后的成活率为86.0%。
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