三氯化铝对体外培养大鼠成骨细胞的毒性作用

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以体外培养的新生SD乳鼠成骨细胞(OB)为实验对象,在培养体系加入终浓度为0.063mg/mL(低剂量染铝组,GL)、0.126mg/mL(中剂量染铝组,GM)、0.252mg/mL(高剂量染铝组,GH)和0mg/mL(对照组,GC)的三氯化铝(AlCl3),培养24h后,应用CCK-8比色法检测细胞增殖率;比色法和放射免疫分析法分别检测OB培养液中碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(BGP)含量;Fura-2/AM荧光法检测OB内钙离子浓度([Ca2+]i);定磷法检测Ca2+-ATPase活性;半定量RT-PCR法检测Ⅰ型胶原(CoL Ⅰ)、BGP mRNA表达量;实时荧光定量PCR检测钙调蛋白(CaM)mRNA表达量;Western blot法检测CaM蛋白表达量,旨在探讨铝对OB的毒性作用,实验结果表明:1.AlCl3对大鼠OB的半数抑制浓度(IC50)为1.26±0.02mg/mL。2.随AlCl3浓度的升高,OB的增殖率呈下降趋势,染铝组与GC比较差异显著(p<0.01),说明AlCl3可抑制OB的活性。3.染铝组OB CoL Ⅰ和BGP mRNA表达量均低于GC,其中,GM和GH差异极显著(P<0.01);染铝组ALP活性显著低于GC(p<0.05;p<0.01),且随AlCl3浓度升高呈下降趋势,呈剂量-效应关系;OB培养液中BGP含量随AlCl3浓度升高呈下降趋势,GH极显著低于GC(p<0.01),说明GM、GH的AlCl3可抑制OB增殖、分化和矿化。4.染铝组OB内[Ca2+]i升高,GM和GH极显著高于GC(p<0.01);CaM mRNA和蛋白表达量均显著低于GC(p<0.05;p<0.01);Ca2+-ATPase活性均低于GC,GL、GM差异不显著(P>0.05),GH差异极显著(p<0.01),表明GH的AlCl3可破坏OB钙稳态。
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