云冷杉叶疫病鉴定及生防菌株和杀菌剂筛选的研究

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云杉属(Picea Dietr)、冷杉属(Abies Mill))是常绿木本植物,树型美观,可用作园林,山地绿化景观树种、也是一种重要的用材树种,在中国市内和山区均有着大面积的栽培。因此,云杉、冷杉病害的发生和危害逐渐受到园林和林业部门的关注和重视。2018年,在东北林业大学帽儿山实验林场发现了一种云杉,冷杉新病害。本文对病害标本采集、形态学鉴定,柯赫氏法则鉴定,分子生物学鉴定、病原菌生物学特性,生物拮抗菌株筛选和化学农药的筛选进行了研究,旨在为该类病害的防控提供了前期研究基础。现将研究结果总结如下:通过对云杉叶疫病病原菌的标本分离纯化。经病原菌形态学鉴定和ITS基因序列比对确认云杉叶疫病病原菌为松杉根球壳孢菌(Rhizosphaera kalkhoffia Bubak)。经病原菌分离、纯化和柯赫氏法则验证,确定了 RP1、RP2菌株是冷杉叶疫病的致病病原菌,经形态学鉴定和ITS基因序列比对确认冷杉叶疫病病原菌RP1为松根球壳孢菌(Rhizosphaera pini(Corda)Maubi.),另外一个 RP2 是多抱多穴腔菌(Sydowia polyspora Bres.)。冷杉叶疫病是在中国首次发现的病害。松根球壳孢菌(Rhizosphaera pini(Corda)Maubi.)是我国新记录种。对病原菌生物学特性研究结果表明:病原菌RP2多孢多穴腔菌(Sydowiapolyspora Bres.)最适生长温度为18℃;病原菌菌丝生长对环境pH值要求不严格;病原菌菌丝生长最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母浸粉。病原菌孢子萌发能力较强,在多种营养液中都可以萌发,在15~20℃萌发速度快,pH值在4.5-9.2之间孢子均能萌发,通过对5种具有生防潜力的菌株的拮抗试验,5种生防菌株都可以对病原菌多孢多穴腔菌(Sydowia polyspora Bres.)的菌丝体生长产生一定的抑制效果。研究得到两种对病原菌RP2菌丝体抑制效果极佳的芽孢杆菌,其中编号BA-3的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)的抑制效果强且稳定,抑菌率始终达100%。两种芽孢杆菌BA-1、BA-3发酵液在20%浓度时,对病原菌RP2孢子萌发抑制效果较好,并且两种芽孢杆菌的抑菌活性在-4℃下可保持至少40d。选取6种低毒杀菌剂对冷杉叶疫病病原菌RP2进行抑菌试验,研究结果表明,多菌灵、甲基硫菌灵对病原菌RP2菌丝生长抑制能力极佳,EC50分别为分别为0.07mg/L和0.17mg/L。其中多菌灵对病原孢子萌发有较好的抑制能力,在100mg/L的浓度下,仍可产生直径达21mm的抑菌圈。综合来看,多菌灵对于病原菌孢子萌发和菌丝生长都有较好的抑制作用,可以在防治上选择使用多菌灵。
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