背景:肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,虽然肝癌的诊断和治疗有所进步,但目前的预后仍然很差。由于肝癌大多数由肝硬化发展而来,不适合手术治疗,寻找新的替代治疗显得非常必要。细胞衰老是一个稳定的细胞周期停滞状态,其可以作为根除肿瘤治疗的新策略已经得到广泛认可。细胞衰老抑制肿瘤主要通过p53和pRB途径,抑制许多诱导生长、增殖和肿瘤产生的信号通路。非遗传毒性压力诱导的衰老主要是通过p16/PRB通路,通过p16INK4a激活抑制CDK4/6的激活。因此,诱导肝癌细胞衰老作为治疗肝细胞癌的方式将非常具有吸引力,特别是在高龄肿瘤病人中。通过对肝细胞癌抑制衰老的分子机制研究,可以为我们寻找潜在的分子治疗靶点提供理论依据。目的:PcG蛋白是一类与衰老相关的蛋白,已经发现他们表达失调与多种肿瘤的发生密切相关。CBX4是PcG蛋白中相对特殊的一个,因为其具有SUMO E3连接酶活性,拥有其它PcG蛋白的额外功能。CBX4能够通过与pRb途径合作促进细胞生长停止,其主要是CBX4与Rb-E2F复合物结合抑制了cyclin A和cdc2的表达,从而把细胞生长停滞在G2期。最近的研究发现CBX4在维持抑制表皮干细胞衰老中发挥重要作用。CBX4的表达失调与肝癌的发生密切相关,并且影响肝癌的预后,但CBX4是否抑制肝瘤细胞衰老仍然未知。因此我们疑惑CBX4表达失调是否与抑制肿瘤细胞衰老有关。本论文旨在探究CBX4抑制衰老在肝癌中的作用,鉴于细胞衰老作为根除肿瘤治疗的新型方式,而CBX4蛋白是一个与衰老密切相关的蛋白,因此,研究CBX4在肿瘤中与衰老的关系显得十分必要。我们希望通过研究CBX4在肝细胞癌中的作用与衰老的关系,进一步阐明CBX4表达与肝癌发生的机制,为原发性肝癌的预测、治疗及预后提供新的理论依据。方法:本实验收集43例(年龄35-81岁)原发性肝癌患者术后的石蜡组织切片。通过免疫组织化学检测肿瘤组织,癌旁组织中CBX4和p16INK4a的表达情况。通过si RNA敲低肝细胞癌bel-7402的CBX4表达,然后分别通过q RT-PCR和western blotting检测m RNA和蛋白水平CBX4的变化情况,并应用衰老相关β-半乳糖苷酶染色法检测转染前后SA-β-gal活性的变化。结果:通过敲低肝癌细胞系bel-7402中CBX4的表达,倒置荧光显微镜明场下观察到,阴性对照组肝癌细胞中未见明显蓝色,敲低后的肝癌细胞内蓝色化合物明显增多。免疫组化结果表明,CBX4在肝癌组织中明显比癌旁组织中表达升高,而P16INK4a在肿瘤组织中低表达,而癌旁组织中p16INK4a表达明显升高。结论:我们的实验数据表明,CBX4的表达与肝癌的恶性程度成正相关,CBX4通过抑制p16INK4a表达抑制肝癌细胞衰老,在肝癌中CBX4通过抑制细胞衰老促进肝癌发展。