体外构建组织工程软骨的实验研究

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实验一 细胞接种密度对软骨细胞生长和细胞外基质合成的影响 目的:采用纤维蛋白凝胶为载体支架,研究细胞接种密度对纤维蛋白凝胶中的软骨细胞增殖、细胞外基质合成以及纤维蛋白凝胶体积变化的影响;探讨体外构建组织工程软骨的最佳接种细胞密度。 方法:体外分离培养3周龄兔关节软骨细胞,将第3代软骨细胞与纤维蛋白混合形成软骨细胞终浓度为:1×10~6/ml(A组)、10×10~6/ml(B组)、50×10~6/ml(C组)的细胞凝胶复合物。动态观察和测定复合物大体形态变化;采用组织化学染色、免疫组织化学染色和扫描电镜动态观察组织形态结构以及其中的细胞密度、硫酸糖胺多糖(Glycosaminoglycan,GAG)、Ⅱ型胶原等成分变化情况;应用DMMB分光法测定组织工程软骨和正常成熟软骨组织的GAG含量;应用胰蛋白酶和胶原酶消化组织分离出软骨细胞,计数软骨细胞数量,了解软骨细胞增殖率。 结果:在细胞-凝胶复合物的制备过程中,软骨细胞与纤维蛋白凝胶能够比较均匀地混合,并固化成一定的外形,细胞无损伤,凝胶块浸泡于培养液中不发生熔融或崩解。体外培养3周期间内,A组和B组细胞-凝胶块内的软骨细胞数量均逐渐增加,到3周时达到高峰(A组细胞-凝胶
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