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第一部分小肝癌病人预后分析目的探索小肝癌病人预后影响因素。方法回顾性分析287例行根治性手术切除的小肝癌病人的临床病理特征,包括临床资料(年龄、性别、病毒感染、血清甲胎蛋白水平(AFP)、周围肝硬化、肿瘤包膜以及边界),病理学资料(肿瘤病理学分化、形态学亚型、微脉管浸润(MVI)、肿瘤炎症细胞浸润(TIL)、周围肝炎症以及硬化分级),分析上述临床病理因素对小肝癌病人预后的影响及与MVI的关系。结果287位病人中,238(82.9%)位为男性,49(17.1%)位为女性,中位年龄52岁。疾病无进展生存(PFS)以及总体生存中位时间(OS)均为54个月。94.0%(268/287)病人有乙型肝炎病毒感染；280位(280/287)具有术前AFP水平记录的病人中,102位(36.4%)病人AFP水平≥200ug/ml;180位(180/287)病人具有术后AFP水平记录,其中119位(66.1%)病人AFP水平≥20ug/ml。89.5%(257/287)位病人周围肝有硬化。283位(283/287)具有肿瘤包膜记录的病人中,165位(58.3%)病人肿瘤包膜完整,118位(41.7%)病人肿瘤具有部分包膜。97.8%(272/287)病人肿瘤具有完整的推挤性边界。46位(16.0%)病人发现MVI。单因素分析提示,有MVI的病人PFS缩短(P值为0.019)。有MVI的肝癌病人中,女性病人(P=-0.000、0.003)、术后血清AFP水平≥20ug/ml(P=0.011、 0.008)、TIL≥50/HPF (P=0.000,0.019)、肿瘤边界清楚(P=0.004、0.043)、肿瘤分化为G1/G2级(P=0.013、0.012)的病人,PFS以及OS较无MVI的病人缩短。周围肝有硬化且有MVI的肝癌病人,PFS时间缩短(P=0.003)。年龄<50岁的肝癌病人,MVI对其PFS有统计学差异的影响(P=0.028)。结论1.MVI是小肝癌病人PFS的独立预后影响因素。2.有MVI肝癌病人中,女性、术后AFP水平≥20ug/ml、TIL≥50个/HPF、肿瘤边界清楚、肿瘤中分化的病人的PFS及OS较无MVI病人缩短。MVI对周围肝有硬化或年龄<50岁的肝癌病人的PFS的影响有统计学差异。第二部分 新鲜肝癌以及癌栓组织microRNA的筛选目的 筛选肝癌和癌栓组织中表达有差异的microRNA。方法 收集16例新鲜肝癌组织和癌栓组织,提取总RNA后,应用Real-time RT-PCR获得基因表达的CT值,以U47作为内参,根据目的基因在对比组织间相对表达量的升高、降低分为两组,应用非配对t检验进行分析。结果1.在新鲜肝癌组织和癌栓组织中分析723种microRNA的差异表达,发现19种microRNA在两组组织间的相对表达量有统计学差异(P<0.05),其中15种nicroRNA在癌栓组织中的表达显著低于肝癌组织,分别为hsa-miR-125a-3p (P=0.01)、hsa-miR-575(P=0.03)、hsa-miR-320 (P=0.02)、hsa-miR-122(P=0.01)、 hsa-let-7c (P=0.03)、hsa-miR-338-3p (P=0.02)、hsa-miR-26a (P=0.02) hsa-miR-486-5p (P=0.00)、hsa-miR-202 (P=0.04)、hsa-miR-765 (P=0.02)、 hsa-miR-125b-2* (P=0.01)、hsa-miR-564 (P=0.03)、hsa-miR-342-5p (P=0.03)、 hsa-miR-623 (P=0.03)、hsa-miR-7-1* (P=0.01),4种microRNA在癌栓组织中的表达显著高于肝癌组织,分别为hsa-miR-21(P=0.00)、hsa-miR-551b(P=0.04)、 hsa-miR-27a (P=0.00)、hsa-miR-876-3p (P=0.04)。2.选择在癌栓与肝癌组织中表达差异最大的两种microRNA,即hsa-miR-125a-3p、 hsa-miR-575作为目的microRNA,在石蜡标本中进一步验证。结论1.在723种microRNA中,发现19种microRNA在肝癌以及癌栓组织之间的相对表达量具有统计学差异,其中15种microRNA在癌栓组织中的表达显著低于肝癌组织,分别为hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575、hsa-miR-320、hsa-miR-122、 hsa-let-7c、hsa-miR-338-3p、hsa-miR-26a、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-202、 hsa-miR-765、hsa-miR-125b-2*、hsa-miR-564、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-623、 hsa-miR-7-1*,4种microRNA在癌栓组织中的表达显著高于肝癌组织,分别为hsa-miR-21、hsa-miR-551b、hsa-miR-27a、hsa-miR-876-3p。2.选择hsa-miR-125a-3p、hsa-miR-575作为目的microRNA,在肝癌石蜡标本中进一步验证。第三部分目的microRNA与肝癌病人临床病理因素相关性分析目的在石蜡标本中验证miR125A-3P及miR575的表达,并分析microRNA的差异表达与肝癌病人临床病理因素的相关性。方法用显微切割的方法收集36例石蜡标本的HCC、MVI、Non-tumor,应用RT-PCR方法获得基因表达的CT值,以U47作为内参,通过计算,获得目的基因在MVI、HCC. Non-tumor组织间的变化趋势。应用Fisher’s exact test分析基因表达的高低与肝癌病人临床病理因素间的相关性。结果1.36例肝癌病人,男性病人31例,女性病人5例,中位年龄为50岁。33例病人有HBV感染,其余3例无肝炎病毒感染。22例病人有肝硬化,14例病人周围肝无硬化。18例病人有微脉管浸润。2.通过显微切割技术获得纯净的标本,所抽提石蜡组织总RNA浓度为4.1422.1ng/ul。3.在HCC以及非癌肝组织中,miR125A-3P、miR575的相对表达与性别、年龄、肝硬化、肿瘤组织学分化程度、有无MVI以及TIL无统计学差异。4.18例有癌栓肝癌病人中,miR125A-3P在TIL≥50个/HPF以及<50个/HPF两组病人的MVI以及非癌肝组织间具有统计学差异。结论1. miR125A-3P. miR575在有癌栓肝癌病人MVI组织中的相对表达量低于HCC以及非癌肝组织,在非癌肝组织中的相对表达量最高。2. miR125A-3P, miR575在无癌栓肝癌病人HCC组织中的相对表达量低于非癌肝组织。3. miR125A-3P在有癌栓肝癌病人TIL>50个/HPF以及<50个/HPF两组病人的MVI、非癌肝组织间具有统计学差异。第四部分石蜡组织中目的microRNA表达差异分析目的探讨miR125A-3P和miR575在有无癌栓两组肝癌病人HCC、MVI以及非癌肝组织中的表达差异。方法应用显微切割技术收集肝癌病人的HCCMVI以及Non-tumor FFPE标本,行RT-PCR获得基因表达的CT值,以U47作为内参,通过配对t检验,探索目的基因在MVI、HCC和Non-tumor组织间的变化趋势。结果1.有癌栓肝癌病人MVI、HCG、Non-tumor组织三组样本两两配对,miR125A-3P在MVI组织中的表达均低于HCC和非癌肝组织,P值分别为0.0053、0.0542。miR575也显示出来同样的表达趋势,P值分别为0.1211、0.2947。miR125A-3P和miR575在HCC组织中的表达均低于非癌肝组织,P值分别为0.4433、0.3394; 0.1945、0.4934。2. miR125A-3P、miR575在有癌栓病人HCC以及非癌肝组织中的相对表达量均高于无癌栓组肝癌病人对应组织,两组病人HCC与非癌肝组织中miR125A-3P的相对表达量均具有统计学差异,P值分别为0.0021、0.0336。miR575在两组病人间HCC与非癌肝组织中的相对表达量无统计学差异,P值分别为0.1478、0.2977。结论1. miR125A-3P在有癌栓肝癌病人MVI与HCC组织中的表达具有明显差异,miR575未显示出统计学差异。两种基因在有癌栓肝癌病人MVI与非癌肝组织以及36例肝癌病人HCC和非癌肝组织间未表现出统计学差异。2. miR125A-3P以及miR575在有癌栓肝癌病人HCC以及非癌肝组织中的相对表达量均高于无癌栓组的HCC以及非癌肝组织,miR125A-3P在两组病人HCC以及非癌肝组织间的表达具有统计学差异,miR575无统计学差异。