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猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来发现严重影响养猪业的一种最小的DNA病毒,是断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原。目前报道检测PCV2抗原的方法有病毒分离、聚合酶链反应技术、免疫组化实验(IHC)、间接免疫荧光(IFA)、原位杂交技术等。然而,这些检测方法均未系统化、标准化,难以推广应用。同时没有快速简便的病原检测技术。本研究就PCV2分子生物学检测方法与免疫荧光方法进行了比较,研究了猪圆环病毒2的胶体金试纸条技术,为寻找适合现场使用的PCV2检测方法奠定了基础。用新生牛血清和标准PCV2阴性猪血清分别稀释1766PCV2细胞适应毒21代,使其终浓度分别为1.0×107 TCID50/ml, 1.0×106 TCID50/ml, 1.0×105 TCID50/ml, 1.0×104 TCID50/ml, 1.0×103 TCID50/ml, 1.0×102 TCID50/ml, 1.0×101 TCID50/ml, 1.0×100 TCID50/ml, 1.0×10-1 TCID50/ml。然后分别用DNA试剂盒抽提病毒DNA、进行普通PCR和实时荧光定量PCR检测。普通PCR检测显示,新生牛血清和猪标准阴性血清稀释的PCV2样本可检测到PCV2抗原的灵敏度均是1.0×103TCID50/ml(约为5.04×104个拷贝/ml)。实时荧光定量PCR检测显示,新生牛血清和猪标准阴性血清稀释的PCV2样本中可检测到的PCV2抗原的灵敏度均是1.0×101TCID50/ml(约5.23×102个拷贝/ml)。细胞病毒分离检测显示,当新生牛血清稀释的样本在PK15细胞培养时,第3代可检测到的PCV2抗原的检测灵敏度是1.0×101TCID50/ml；而当猪血清稀释的样本在PK15细胞培养时,第3代可检测到的PCV2抗原得灵敏度是1.0×103TCID50/ml。这些结果说明,细胞培养病毒分离法对猪血清中PCV2的分离能力低于对牛血清中PCV2病毒分离能力的100倍,实时荧光定量PCR是实验室检测猪血清样本中PCV2的抗原首选方法。用柠檬酸三钠还原法制备的金溶胶对纯化的单克隆抗体PCV2-ORF2-5E11、PCV2-ORF2-8A12、PCV2-ORF2-6H9和PCV1-ORF2-3F11进行标记,结果显示,胶体金标记单克隆抗体IgG的最佳工作浓度是20ng/ml胶体金。以亲和层析纯化的猪抗PCV2 IgG为检测线、羊抗鼠IgG为质控线、以胶体金标金的单克隆抗体为抗体与待检抗原反应。用Millpore 135硝酸纤维素膜和Ahlstrom 8964玻璃纤维素膜在Bio-dot三维喷点仪上制备试纸条,结果显示,金标PCV2-ORF2-6H9和PCV2-ORF2-8A12的两种试纸条可快速、特异性的检测基因组大小分别1766bp和1767bp的PCV2。金标PCV2-ORF2-6H9的试纸条对基因组大小为1766bp的PCV2病毒的检测灵敏度是1.0×107TCID50/ml,而对基因组大小为1767bp的PCV2病毒的检测灵敏度是1.0×106 TCID50/ml;金标PCV2-ORF2-8A12的试纸条对基因组大小为1767bp的PCV2的检测灵敏度是1.0×108TCID50/ml。试纸条在4℃或室温的有效保存期达12个月以上。