【摘 要】
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目的:研究TNFα预处理诱导的CXC趋化因子生成耐受的机制。方法:培养与扩增结直肠癌HCT116细胞。建立TNFα预处理诱导结直肠癌HCT116细胞CXC趋化因子生成耐受的模型,ELISA及q
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目的:研究TNFα预处理诱导的CXC趋化因子生成耐受的机制。方法:培养与扩增结直肠癌HCT116细胞。建立TNFα预处理诱导结直肠癌HCT116细胞CXC趋化因子生成耐受的模型,ELISA及q RT-PCR分析上清液中CXC趋化因子的分泌及HCT116细胞中CXC趋化因子m RNA的表达。RT-PCR及FACS检测TNFα对HCT116细胞TNFR1、TNFR2表达的影响。q RT-PCR及Western blot分析检测MAPKs及NFκB通路活化与CXC趋化因子的产生的关系。q RT-PCR及Western blot分析检测TNFα对A20表达的影响。用A20过表达质粒转染HCT116细胞并用Western blot分析检测A20过表达对TNFα诱导趋化因子生成的影响。在si RNA抑制HCT116细胞A20表达后,用q RT-PCR检测TNFα预处理诱导趋化因子生成耐受的情况。结果:1.TNFα预处理诱导HCT116细胞中CXC趋化因子生成出现耐受。2.TNFα不影响HCT116细胞TNF受体的表达。3.TNFα通过ERK信号通路诱导HCT116细胞CXC趋化因子生成。4.TNFα上调HCT116细胞A20的表达。5.A20过表达抑制TNFα诱导的HCT16细胞趋化因子的产生和ERK激活。6.抑制A20逆转TNFα预处理所指的TNFα再处理诱导的CXC趋化因子下调。结论:1.TNFα预处理诱导结直肠癌HCT116细胞的CXC趋化因子产生有诱导耐受。2.A20可能通过抑制ERK信号传导通路逆转TNFα预处理诱导趋化因子产生耐受。
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