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单核/巨噬细胞是一群与先天性免疫相关的细胞,它们在应对病原微生物、炎症反应、自身修复等方面都有着完善的功能与机制。哺乳动物中的Th2型细胞因子(IL-4和IL-13)可替代性激活单核/巨噬细胞,呈现出抗炎症的状态。但是鱼类的IL-4/13A和IL-4/13B作为IL-4和IL-13的同源物,对单核/巨噬细胞的极化作用还有待研究。本论文中,从大黄鱼中克隆得到了IL-和IL-13的同源基因LycIL-4I13A和LycIL-4/13B,发现两者的氨基酸序列与已报导的其他硬骨鱼IL-4/13的氨基酸序列一致性较低。进化树分析表明,LycIL-4/13A和海鲈的IL-4/13A进化关系最近,而LycIL-4/13B和红鳍东方豚IL-4/13B进化关系最近。LycIL-4I13A和LycIL-4/13B在大黄鱼不同组织及免疫相关细胞中均呈组成型表达,但转录水平有所不同。LycIL-4/13AmRNA转录水平在鳃中最高,而LycIL-4/13B的mRNA转录水平在心脏、鳃、脾脏、外周血淋巴细胞和头肾单核/巨噬细胞中较高。灭活细菌三联疫苗刺激后,LycIL-4/13A和LycIL-4/13B的mRNA在大黄鱼头肾中转录水平上调,分别在刺激后24 h和48 h达到最高。在大肠杆菌中重组表达了 LycIL-4/13A 和 LycIL-4/13B(rLycIL-4/13A 和 rLycIL-4/13B)。利用纯化的重组蛋白处理从大黄鱼头肾中分离得到的单核/巨噬细胞,可抑制其在呼吸爆发过程中产生活性氧(ROS)和超氧阴离子(O2-)。并且随着rLycIL-4/13A或rLycIL-4/13B浓度的升高,细胞内的ROS和O2-产量减少,rLycIL-4/13A和rLycIL-4/13B的浓度分别为1000 ng/mL和100 ng/mL的时候,ROS和02-的产量达到最低。同样,用不同浓度的rLycIL-4/13A或rLycIL-4/13B处理单核/巨噬细胞6 h后,细胞内的NO产量也有不同程度的减少。大黄鱼头肾单核/巨噬细胞用不同浓度的rLycIL-4/13A或rLycIL-4/13B处理后,其吞噬荧光微球的能力也被不同程度抑制。用 1000 ng/mL 的 rLycIL-4/13A 或 100 ng/mL 的 rLycIL-4/13B 分别处理大黄鱼单核/巨噬细胞12 h、24 h和48 h,发现巨噬细胞分泌的促炎症因子(IL-1β,TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA转录水平下调,而生长因子(VEGF,TGF-β)和精氨酸合酶-2(arginase-2 mRNA转录水平上调。这些结果表明尽管LycIL-4/13A和LycIL-4/13B的分子特征有所不同,但都可促进单核/巨噬细胞往M2型巨噬细胞活化。