洋桔梗(Eustomagrandiflorum(Raf.)Shinn.),是目前国际上十分流行的盆花和切花种类之一。在洋桔梗未开花时,不同类型种质材料的形态特征很相似。目前,缺少能够区别这些种质的有效方法,给生产应用等带来诸多不便。为了解决这一问题,本研究以洋桔梗不同品种、不同转基因株系等不同类型种质材料为试材,展开了如下的一系列研究。首先,以洋桔梗’玛丽艾基粉色’和’圣剑白底紫边’两个品种为试材,利用植物基因组DNA快速抽提试剂盒提取其叶片DNA,经过EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ双酶切、DNA酶切片段与EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ接头连接、预扩增、选择性扩增、聚丙烯酰氨凝胶电泳和银染,优化了其中酶切时间、酶切温度、连接时间等关键条件,建立了洋桔梗AFLP最佳反应体系。然后对AFLP常用的64对引物进行了筛选,得到154个多态性条带,从中筛选出扩增条带较多且多态性较好的E-ACA/M-CTC、E-ACC/M-CAC、E-AGC/M-CTT 和E-ACT/M-CAG 共 4 对引物,其多态位点百分率均值为24.36%。然后,再利用筛选出的4对引物,以最佳反应体系为基础,构建了常见的7个洋桔梗品种(’玛丽艾基粉色’、’圣剑白底紫边’、’玛丽艾基绿色’、’露西塔1白底粉边’、’露西塔2 白色’、’雪莱香槟色’和’维纳斯粉色’)清晰的AFLP指纹图谱。继而统计了不同品种各4个引物组合在1000～300 bp区间7个区段的扩增条带,将各个品种的AFLP指纹图谱转换成了各个品种4组7位数构成的28位特异数字指纹,根据不同品种的特异数字指纹,直接比较它们的特异数字指纹差异,即可很容易地将它们加以区分、鉴定。本研究得到的特异数字指纹更加具体明确,且该特异数字指纹是以扩增条带(不是差异条带)为基础构建的。因此,其可不以与其它种质比较为条件而独立构建,大大方便了种质比较及鉴定。利用NTSYS 2.10软件计算得出7个洋桔梗品种间的遗传相似系数在0.6835～0.8608 之间,平均值为 0.7746。最后,建立了’雪莱香槟色’不同种子10个株系清晰的AFLP指纹图谱,继而利用与不同品种转换特异数字指纹相同的方法,得到4组7位数构成的28位特异数字指纹。利用NTSYS 2.10软件计算得出’雪莱香槟色’ 10个不同种子间遗传相似系数在0.8971～0.9706之间,平均值为0.9327。建立了 ’玛丽艾基粉色’同一种子不同再生10个株系清晰的AFLP指纹图谱,得到4组7位数构成的28位特异数字指纹(方法同上)。利用NTSYS 2.10软件计算得出’玛丽艾基粉色’同一种子不同再生株系间及其与母株间的遗传相似系数在0.9677～1.0000之间,平均值为0.9912。建立了’玛丽艾基粉色’不同转基因6个株系(2个转ACS干扰株系、2个转ACC合酶株系和2个转β-1,3-葡聚糖酶基因株系)清晰的AFLP指纹图谱,得到4组7位数构成的28位特异数字指纹(方法同上)。利用NTSYS 2.10软件计算得出’玛丽艾基粉色’不同转基因株系间及其与非转基因株系间的遗传相似系数在0.9692～1.0000之间,平均值为0.9868。建立了’玛丽艾基粉色’同一种子不同无性繁殖10个株系清晰的AFLP指纹图谱,结果表明,’玛丽艾基粉色’不同无性繁殖株系扩增的条带与其母株完全一致。通过转换得到上述不同类型种质材料的特异数字指纹,结果表明,特异数字指纹只能有效区分7个不同品种、’雪莱香槟色’ 10个不同种子株系。虽然特异数字指纹不能明确区分其他类型种质的各个株系,但是除’玛丽艾基粉色’ 10个不同无性繁殖株系外,其他类型种质因有差异条带的存在,利用NTSYS 2.10软件计算遗传相似系数,还是可以检测到遗传差异的。利用SPSS 16.0软件对上述不同种质材料(除无性繁殖株系)的遗传相似系数进行了单因素方差分析,发现再生株系与转基因株系的遗传相似系数间没有显著性差异,其它种质之间有显著性差异。本研究建立的洋桔梗AFLP最佳反应体系、筛选出的4对引物、构建的不同种质材料的指纹图谱、转换的特异数字指纹及计算的遗传相似系数,为进一步开展更多洋桔梗遗传差异分析及种质鉴定研究奠定了基础。