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研究背景与目的:中枢神经系统脱髓鞘疾病是临床上常见的一类病因不明的、以髓鞘脱失为显著病理特征的神经退行性疾病。临床上尚未有彻底治愈这类疾病的药物。开发以“促髓鞘再生”为手段治疗中枢脱髓鞘疾病的药物,将会对彻底治愈这类疾病带来希望。前人的研究发现,法尼酯X受体（Farnesoid X receptor,FXR）对自身免疫介导的中枢炎性脱髓鞘模型小鼠具有保护作用。本研究以FXR受体为作用靶点,选择FXR受体的激动剂灵芝酸A（Ganoderic acid A,GAA）为研究对象,在细胞和动物水平系统性地研究了GAA激活FXR受体来调节神经免疫促进髓鞘再生的作用及其可能的机制,为临床上治愈中枢脱髓鞘疾病提供一种潜在作用靶点与候选化合物。研究方法:一、小胶质细胞实验:选择用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激小鼠BV2小胶质细胞诱发炎症反应。采用CCK-8法测定GAA对LPS诱导的BV2小胶质细胞增殖作用的影响;采用细胞免疫荧光染色和蛋白免疫印迹检测评价GAA对LPS诱导的BV2小胶质细胞的作用,检测指标包括Iba1,i NOS,Arg-1,TNF-α,IL-1β,IL-6,BDNF以及FXR;选择FXR受体的拮抗剂没药甾酮（Z-gugglesterone,GS）阻断FXR受体,观察FXR阻断后GAA对LPS诱导的BV2细胞中TNF-α和BDNF表达变化的影响。二、动物模型实验:（1）观察GAA对双环己草酮酰二腙（Cuprizone,CPZ）诱导的中枢脱髓鞘疾病模型小鼠的作用。采用转棒实验评价小鼠的运动功能;采用LFB染色和MBP染色评价胼胝体区髓鞘含量的表达变化;采用Iba1、GFAP、Olig2免疫荧光染色分别评价胼胝体区小胶质细胞、星形胶质细胞以及少突胶质前体细胞数量的表达变化;采用蛋白免疫印迹检测IL-6以及FXR在胼胝体区的表达变化;分别选择用GS阻断FXR或者敲除FXR,观察FXR缺失后GAA对CPZ诱导的中枢脱髓鞘疾病模型小鼠的作用。（2）观察GAA对MOG35-55诱导的中枢炎性脱髓鞘疾病模型（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠的作用。采用转棒实验评价小鼠的运动功能;采用脾脏形态学观察与HE染色,评价自身免疫反应和炎性细胞浸润;采用LFB染色和MBP染色,评价髓鞘脱失;分别采用Iba1和GFAP免疫荧光染色,评价小胶质细胞和星形胶质细胞在脊髓白质区域的表达变化情况。研究结果:一、小胶质细胞实验:（1）CCK-8法检测结果表明,GAA能够显著抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞增殖;（2）免疫荧光染色和蛋白免疫印迹检测结果显示,GAA能够显著抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞中Iba1的表达以及促进FXR的表达;GAA对于LPS诱导的BV2细胞中高表达的促炎因子（i NOS,IL-6,IL-1β和TNF-α）具有显著的抑制作用,对于低表达的抗炎因子Arg-1和BDNF具有显著的促进作用;（3）蛋白免疫印迹检测结果发现,应用GS阻断FXR后,GAA对LPS诱导的BV2小胶质细胞中TNF-α和BDNF表达的调节作用被抑制。二、CPZ模型:（1）连续5周饲喂含0.2%CPZ的模型饲料能成功诱导中枢脱髓鞘疾病模型。病理表现主要包括:与正常对照组相比,体重下降,运动功能下降,髓鞘脱失,Iba1+、GFAP+以及Olig2+细胞在胼胝体区的数量显著增加;（2）向CPZ诱导的中枢脱髓鞘疾病模型小鼠连续7天给予GAA,转棒实验表明GAA能够显著改善模型小鼠的运动功能;LFB染色和MBP染色结果表明,GAA能够显著抑制模型小鼠的髓鞘脱失;免疫荧光染色表明,GAA能够显著抑制胼胝体区Iba1+、GFAP+以及Olig2+细胞的激活;蛋白免疫印迹检测发现,GAA能够显著抑制胼胝体区IL-6的表达和促进FXR的表达。（3）采用转棒试验、LFB染色,免疫荧光染色以及蛋白免疫印迹检测等技术,应用GS阻断FXR或者敲除FXR后,GAA对CPZ诱导的中枢脱髓鞘疾病模型小鼠的改善作用被显著抑制;三、EAE模型:GAA能够显著降低EAE模型小鼠的行为学评分以及改善运动功能;脾脏形态观察和HE染色结果表明,GAA能够显著抑制EAE模型小鼠的脾脏肿大以及炎性细胞浸润;LFB和MBP染色结果表明,灵芝酸A能够显著促进EAE模型小鼠脊髓白质中髓鞘含量的表达;免疫荧光染色表明,GAA能够显著抑制EAE模型小鼠脊髓白质区的Iba1+、GFAP+细胞的增加。研究结论:本研究发现:灵芝酸A能够通过激活FXR受体,抑制神经炎症的发生、改善运动功能以及促进髓鞘再生,对中枢脱髓鞘疾病起到显著的改善作用,这为临床上治疗中枢脱髓鞘疾病提供了一种新的靶点和潜在候选化合物。