近年来,随着石油的不断开采挖掘,各种溢油事故也随之频繁发生,因石油泄漏导致的土壤污染问题日益严重,备受国内外学者的关注。正基于此,人们试图寻找一种高效、环保、成本低的治理方法,而微生物土壤修复法以其独特的优势受到越来越多的学者关注。从石油污染区域取样进行纯化、分离和鉴定能高效降解石油烃的微生物,并探究解烃微生物的降解机理已经成为该领域的热点。微生物在氧化石油污染物时,其胞内烷烃羟化酶起着关键作用,探索烷烃羟化酶基因序列及其相关的调控表达将有利于探寻烷烃降解菌对石油烃的降解机理,从而为微生物石油污染修复提供一定的实践依据。本课题组从原南充市炼油厂附近的石油污染土壤采集样品,筛选到一株能高效降解中长链烷烃的石油降解菌TY22,该菌株属于Acinetobacter beijerinckii,能降解C₆-C₃₂的直链烷烃。因此,该菌有一定石油污染土壤修复的潜能。TY22菌株的羟化酶基因alkB序列与不动杆菌M-1（Acinetobacter sp.M-1）的alkB序列同源相似性达到88%,为了探究解烃菌TY22烷烃羟化酶的特性,本文通过查阅大量文献,设计alkB基因的上游和下游引物。以TY22菌株的基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应扩增获得其降解石油烃的羟化酶基因编码序列。将该目的基因与载体pET28a（+）连接构成重组质粒,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行蛋白表达,发现以0.1 mM IPTG作为诱导剂、转速为180 rpm、温度为37℃的条件下培育4 h,目的蛋白表达量较高,电泳检测结果说明目的蛋白分子量约为45 kDa,与预期一致。为了进一步探寻该解烃菌酶活的反应条件,采用镍亲和层析方法对重组蛋白进行纯化,采用考马斯亮蓝法测得纯化后的重组蛋白浓度为1.475 mg/ml;对该酶粗提液活性的最适条件进行实验,发现其最适温度在30℃和40℃之间,最适pH在7.5左右;在pH 7.5、37℃的条件下,测出酶活为0.076 U/mg。并在菌株Pseudomonas fluorescens KOB2Δ1和E.coli GEc137中进行功能互补实验,结果表明表明解烃菌TY22的alkB基因具有降解烷烃C₁₂^C₁₆的功能。该实验结果为进一步利用该菌株进行石油废水的生物处理提供一定的理论依据。