抗病信号传导基因RAR1在小麦抗病基因工程中的应用

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近年来,小麦白粉病、条锈病、纹枯病等病害已成为影响小麦生产的重要限制因素之一。加强抗病反应机制研究非常重要。目前,我国小麦品种中白粉病、条锈病抗性大多由单基因控制,与病原菌无毒基因之间作用方式大多遵循“基因对基因”的假说。 RAR1编码的蛋白是最早报道的植物防卫信号蛋白。首次是从大麦抗白粉病基因Mla12介导的抗病信号途径中分离的一个重要信号元件。随后的大量研究发现,在大麦中RAR1是许多抗白粉病基因Mla介导抗性所必须的。RAR1编码一个大约25.5kD的锌结合蛋白,包含有一个CCCH结构域,两个由60个氨基酸组成的锌结合域(zine-bindind domains)CHORD-Ⅰ和CHORD-Ⅱ(cysteine and histidine-rich domain)。RAR1在多种植物对真菌、细菌和病毒的抗性中均是必要的信号分子。 为研究RAR1在小麦抗病途径中的作用,本课题组从抗病中间偃麦草(Thinopyrumintermedium)中分离克隆出RAR1基因,将RAR1基因置换质粒pAHC25上的GUS基因,正确构建了单子叶高效表达载体pURAR1,其中RAR1基因受来自玉米的Ubiquitin启动子控制,筛选基因为BAR基因。 采用基因枪法转化小麦推广品种扬麦11、12幼胚愈伤组织3044个,经过2-3次Bialaphos筛选,获得265株再生植株,通过PCR检测获得阳性植株23株,转化率为0.76%。 对T1代转基因材料进行PCR检测,检测到23株阳性植株,分离比为2.6:1;Southern分析表明RAR1的拷贝数为1-3个,说明RAR1基因已经整合到小麦基因组中;对部分植株进行RT-PCR分析,同时进行抗白粉病鉴定,在转RAR1基因T1代阳性植株中,有14株全生育期对小麦白粉病菌混合小种免疫,说明RAR1基因能够在小麦中遗传、其超量表达赋予受体小麦对白粉病菌的高度抗性。
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