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甲醇广泛存在于工业废水中,不仅污染环境,而且对人体健康造成危害。本实验采用实验室前期从环境中筛选到的菌株Methylobacteirum sp. MB200是一种甲基营养菌,它以甲醇作为碳源,且能合成L-丝氨酸,既能降解环境污染物又产生经济效益。实验室前期利用自杀质粒pTnMod-RKm’及向培养基中添加不同浓度的L-丝氨酸,筛选出了177株可耐受L-丝氨酸的突变体。通过分子生物学手段,从突变体中克隆基因。通过生物信息学分析,本实验发现从上述突变体之一S027中,克隆到的mtaA在基因核苷酸水平上与来自于Methylobacteriumextorquens PA1的mtaA有94%的一致性,在氨基酸水平上与来自于Methylobacterium populi BJ001的mtaA有97%的相似性。该基因全长876bp,编码的是甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP),对该酶进行功能域分析,发现其属于核苷磷酸化酶超家族。实验发现Methylobacteirum sp. MB200中有MTAP酶活性,且酶活性随L-丝氨酸浓度的变化呈现一定规律。利用质粒pK18mobSacB与表达载体pCM80,三亲本接合的手段构建了M. sp. MB200的两个重组菌株MB200TB及MB200HB,它们分别是在原始菌株缺失了mtaA基因的突变体及将带有mtaA基因的重组质粒导入突变体的回补体,目地就是为了研究M. sp. MB200的mtaA基因及其编码的MTAP酶的特点。对这两个重组菌株的甲硫腺苷磷酸化酶进行酶活测定,结果显示mtaA基因确实受L-Ser的反馈抑制调节。通过向MMI培养基中添加不同浓度的L-丝氨酸,对原始菌株M. sp. MB200、MB200TB及MB200HB耐受L-丝氨酸的情况进行了实验分析,结果表明突变体MB200TB比野生菌MB200及回补株MB200HB可耐受的L-丝氨酸浓度高。M. sp. MB200中mtaA基因的缺失突变对菌体有提高其L-丝氨酸耐受性的作用。通过MMI培养基中原始菌株M. sp. MB200、MB200TB及MB200HB生长情况的分析,发现突变体MB200TB的生长情况与野生型M. sp. MB200和回补菌株MB200HB无明显差异,这说明mtaA基因的突变不影响在MMI培养基上的生长。最后再通过静息细胞反应体系的制备,对原始菌株M. sp.MB200、MB200TB及MB200HB发酵产L-丝氨酸的情况进行了分析。结果发现重组菌株MB200TB及MB200HB的产量相对于原始菌株都有所提高。