苹果铁高效基因型生物技术的研究——根总RNA提取方法的比较及mRNA的纯化

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mengjie86
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小金海棠是苹果铁高效基因型,携带有与铁高效利用相关的基因,是进行铁高效基因研究的重要材料.该实验故此以小金海堂为试材,进行缺铁胁迫下其根RNA提取方法的比较,以期找到一种适合于小金海棠根RNA提取的方法,并在此基础上对其进行mRNA纯化.结果表明,在所用的异硫氰酸胍-酚-氯仿法,SDS-苯酚法,Trizol法及改进的SDS-苯酚法等四种方法中,就缺铁胁迫下小金海堂根的RNA提取来说,以SDS作为RNA酶变性剂比异硫氰酸胍更为有效;硼酸的使用可以有效地解决RNA提取过程中多酚氧化的问题;而在20﹪体积无水乙醇和0.5M K+的条件下,可选择性沉淀多糖,能够有效地防止多糖对RNA的污染.因此,改进的SDS-苯酚法较为适合缺铁胁迫下,小金海棠根RNA的提取;在此基础上纯化得到的mRNA,虽然产量偏低(0.5﹪),但纯度达到预期效果.
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