由于化学农药和农用抗生素滥用，农业病虫害不仅对化学农药产生了抗药性，甚至对原本效果很好的农用抗生素也产生了抗药性，农业生产面临着严重威胁。几丁质是农业害虫和植物病原真菌的组成成分，几丁质酶是它们的生命活动中不可缺少的酶类，而对于人类和高等动植物来说，几丁质酶不是生命活动所必须的，因此，以几丁质酶为靶标，寻找几丁质酶抑制物来防治有害昆虫和真菌病害，是安全可行的，开展相关研究具有重要的理论和实践意义。 本研究从土壤环境中筛选到一株可产生几丁质酶抑制物的菌株，围绕菌株的分类鉴定、发酵条件优的化、活性成分的纯化鉴定和相关性质的分析，展开了系统的研究。 1．几丁质酶抑制物产生菌的筛选 从土壤中分离到了800多株微生物，其中细菌600株左右，放线菌200多株，以家蚕几丁质酶为靶标，采用胶体几丁质平板透明圈法，对它们的发酵液离心后取上清液进行筛选，发现编号为CQBB218的菌株的发酵液对家蚕几丁质酶有很强的抑制活性，其发酵液的抑制活力达到2.65 U_i／mL。 2．几丁质酶抑制物产生菌CQBB218的分类鉴定 通过菌体个体形态特征、菌落特征和生理生化试验结果，再结合16S rRNA序列分析，对该菌株的作了鉴定。其菌体杆状，有芽孢，有鞭毛，革兰氏染色呈阳性：菌株CQBB218在牛肉膏蛋白胨平板上的菌落特征：一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、质地均匀、以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等，菌落圆形、边缘不规则，没有色素分泌：对其20项生理生化试验指标作了鉴定，各项生理生化指标基本与芽孢杆菌相符；该菌株的16S rRNA序列与GenBank数据库中登录号为AB247137.1的Bacillus cereus的16S rRNA序列有99％同源性，仅相差3个碱基。综合以上各指标鉴定后认为该菌属于芽孢杆菌属，因此将该菌株命名为Bacillus sp．CQBB218。 3．Bacillus sp．CQBB218发酵条件的优化 对该菌株的发酵条件作了研究，得到了培养基的最佳碳源为淀粉、最佳氮源为酵母膏、最佳金属离子为Mn²⁺以及最适的初始pH值为pH8.0，发酵时间以72h效果最好，装瓶量为40％为最佳，最适的发酵温度为30℃等。在取得最佳碳源、最佳氮源和最佳金属离子的基础上，通过正交试验得到最佳发酵培养基，即：淀粉0.2％，酵母膏0.6％，MnCl₂ 0.1％，以此为培养基发酵后得到的上清液的抑制活力为2.77 U_i／mL。 4．几丁质酶抑制活性成分的分离纯化及类别鉴定 在实验中发现该几丁质酶抑制物是一种蛋白质，因此，采取了蛋白质的纯化步骤对其纯化，首先将Bacillus sp．CQBB218的发酵液离心后取上清，用硫酸铵分级盐析并脱盐后再用DEAE Sepharose FF离子交换柱进行纯化，将有抑制活性的样品冷冻干燥浓缩，将浓缩样品