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目的：通过T7噬菌体展示技术筛选具有临床价值的乳腺癌肿瘤标志物。
方法：利用T7噬菌体cDNA文库与5例乳腺癌患者血清和5例体检正常对照血清进行4轮亲和性筛选，噬菌体在E.coliBLT5615内扩增。挑选100个单克隆噬菌体PCR扩增，选取84个大于300bp噬菌体测序并比对基因序列，信息学分析后选取2种基因作为乳腺癌候选标志物。RT-PCR法检测40例乳腺癌癌组织及其癌旁组织和32例良性乳腺肿瘤组织中候选标志物的表达水平；ELISA检测上述乳腺癌患者、40例其他癌症患者以及54例体检正常女性血清中候选标志物的表达，检测结果在酶标仪450nm波长下读取OD值，用空白孔调零后，样品OD值/阴性对照平均OD值，比值≥2.0，判断为阳性；样品OD值/阴性对照平均OD值，比值＜2.0，判断为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算；分析外周血ELISA检测与组织RT-PCR检测的一致性。候选标志物的临床验证：ELISA法检测273例乳腺癌患者血清候选标志物表达阳性率，同CA15-3阳性率比较分析，以正常对照组(54例)和其他癌症组(40例)为阴性对照，制作乳腺癌血清CA15-3以及两候选标志物的受试者工作曲线(ROC)，评价两候选标志物和CA15-3对乳腺癌的诊断价值，并分析两种候选标志物与乳腺癌的早期诊断、临床分期、病理类型以及转移的关系。
结果：4轮筛选和扩增后与乳腺癌血清特异性结合的噬菌体富集了6000倍。从第4轮筛到的PCR扩增片段300bp以上噬菌体克隆噬菌体中随机挑取84个单克隆，测序后经信息学分析得到5种基因：NUP50、HNRNPF、β2-M、FTH1、SLC40A1，选取hnRNPF、FTH1作为乳腺癌候选标志物验证。RT-PCR检测hnRNPFmRNA、FTH1mRNA在乳腺癌组织中的阳性率显著大于癌旁组织以及良性乳腺肿瘤组织(P＜0.05)，ELISA检测hnRNPF抗体、FTH1抗体在乳腺癌患者血清中的阳性率显著大于其他癌症患者以及正常对照组(P＜0.05)。两指标在乳腺癌组织和血清中的表达具有较高的一致性。候选标志物临床验证：hnRNPF抗体、FTH1抗体与CA15-3ROC曲线单项检测时CA15-3的诊断指数(敏感性+特异性)最大，hnRNPF抗体与CA15-3联合诊断乳腺癌时诊断指数最大，与三项联合无明显差异(P＞0.05)；hnRNPF、FTH1在非早期乳腺癌、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期乳腺癌以及淋巴结转移的乳腺癌患者血清中的阳性率分别高于早期乳腺癌、0～Ⅰ期乳腺癌、淋巴结未转移的乳腺癌患者(P＜0.05)，在Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期乳腺癌之间无显著性差异(P＞0.05)，与病理分型无明显的相关性(P＞0.05)。
结论：hnRNPF、FTH1与乳腺癌的早期诊断、临床分期(在0～Ⅰ期与其他Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期的鉴别)和转移有一定的相关性，而与病理分型无明显的相关性；血清hnRNPF抗体与CA15-3联合检测在一定程度上提高乳腺癌诊断的准确性。